Японская биозавивка отзывы: Японская завивка волос в Казани — 146 мастеров, проверенные отзывы, цены и рейтинг на Профи — Магазин корейской косметики

Содержание

Иновационная текстур- укладка TOCOSME

Японская формула TOCOSME задаёт новый уровень для завивок, и в его основе уход. Инновационный состав работает на структуру волос: равномерно проникает вглубь и выравнивает поверхность. Блеск, объём, сияние — TOCOSME — визитная карточка роскошной укладки.

Преимущества TOCOSME перед традиционной завивкой

ü Низкое содержание щелочи —нейтральный pH

ü Короткий промежуток для повторной процедуры

ü Можно применять на повреждённых волосах

ü Восстановление структуры волоса

ü «Усмирение» непослушных волос

ü Чёткие локоны и лёгкая укладка

ü Окрашивание в день завивки

TOCOSME в действии

Формула работает с повреждёнными волосами и оздоравливает их. Даже если в прошлом был неудачный опыт с химической завивкой, японская текстур-укладка изменит представление о процессе и результате.

Каждый компонент направлен на устранение повреждений, которые возникают после окрашиваний и неблагоприятного воздействия окружающей среды. Степень завивки и упругость может варьироваться от чётких локонов до мягких волн.

До

После

· Тусклые волосы

· Посечённые концы

· Непослушные пряди

· Отсутствие объёма

· Повреждённые и потерявшие эластичность

· Улучшается светоотражающая способность

· Формируются упругие локоны и волны

· Сокращается ломкость и сухость

· Появляется блеск и свечение

· Исчезают секущиеся кончики

· Увеличивается объём

Уникальные свойства формулы TOCOSME

Лечение

Натуральные компоненты направленно действуют на восстановление структуры волос. Мягкие и шелковистые локоны обретают красоту на продолжительное.

Защита

Чувствительную поверхность волоса защищает масло жожоба. Оно образует питательное «покрытие».

Увлажнение

Для упругих локонов важен оптимальный уровень pH. Формула регулирует степень «увлажнения», что способствует лучшему проникновению компонентов и поддерживает здоровый вид надолго.

Приятный аромат

Присутствие природный компонентов позволило избавиться от резкого химического запаха. Это снижает дискомфорт в процессе процедуры, и после волосы обладают приятным ароматом.

Технология с цистеамином — инновационный путь здоровья волос

В состав TOCOSME входит цистамин, который бережно воздействует и в отличии от тиогликоливой кислоты «создаёт» естественный вид укладки с мягким силуэтом. Структура волоса не разрушается, а временно изменяется. Через 5 – 6 месяцев локоны постепенно «распрямляются», сохраняя естественную и эстетичную форму.

Используемые нано-технологии NO3 отвечают за равномерное распределение формулы и глубокое проникновение. Это имитирует максимально натуральные завитки, идентичные вьющимся от природы волосам. Обычные смеси низко эффективны в сравнении с TOCOSME: они проникают каплями и неравномерно.

Натуральные компоненты TOCOSME для здоровья и ухода за волосами

Масло ореха макадамии

Восстанавливает повреждённые волосы

Масло Ши

Питает и поддерживает волосы в процессе и после завивки

Масло жожоба

Защищает поверхность волоса после процедуры

Масло камелии

Предотвращает появление секущихся кончиков и сухость

Экстракт японской хурмы

Ароматизирует, что делает процедуру приятной, а волосы после благоухающими

Экстракт томата

Борется с неприятным «химическим» запахом

Лимонная кислота

Нейтрализует остатки щелочи для регулировки уровня pH

Танин

Дезодорирует и сокращает неприятный запах во время процедуры

Масло первоцвета

Стимулирует рост волос и борется с обезвоживанием

Масло шиповника

Укрепляет волосы и стимулирует восстановительные процессы

Японская завивка TOCOSME — красота без жертв!

Наши мастера не идут на компромиссы, когда дело касается здоровья волос, и формула TOCOSME активно помогает достигает роскошного визуального эффекта и качественного ухода.

Текстур-укладка открывает широкие возможности для создания яркого образа.

Великолепный результат радует не только с эстетической стороны, но и помогает восстановить волосы.

На продолжительный период вы становитесь обладательницей роскошных и послушных локонов, наполненных живым блеском.

Компетентные специалисты готовы ответить на ваши вопросы по телефону

8(495)507-33-75

или

Вы можете записаться онлайн

Японская биозавивка волос в Абакане

Японская биозавивка волос в Абакане — организации с адресами и телефонами, отзывами и пользовательским рейтингом. Сайты и график работы компаний, списком предоставляемых дополнительных услуг.

Параметры поиска

Японская биозавивка волос в Абакане: адреса компаний

72 организации для красоты и здоровья

1. Leon
2. ул. Чертыгашева, 63А
3. +7 (3902)… показать все
4. _{ежедневно, 10:00–19:00}
4. 4/521 оценка
1. Golikova_nail_art
2. ул. Чертыгашева, 72
3. +7 (913) … показать все
4. _{ежедневно, 08:00–20:00}
5.0/56 оценок
1. 7я
2. ул. Тельмана, 83
3. +7 (923) … показать все
4. _{ежедневно, 10:00–19:00}
3.2/514 оценок
1. Находка
2. ул. Павших Коммунаров, 178
3.7/510 оценок
1. SK Beauty
2. ул. Пушкина, 66
3. +7 (923) … показать все
4. _{пн-сб 09:00–20:00}
4.7/512 оценок
1. Евро-Шарм
2. ул. Щетинкина, 71
3. +7 (3902)… показать все
4. _{пн-сб 09:00–20:00}
4.4/529 оценок
1. Gala Престиж
2. ул. Чертыгашева, 102
3. +7 (3902)… показать все
4. _{пн-сб 09:00–20:00}
4.2/510 оценок
1. Мирра
2. ул. Кати Перекрещенко, 10
3. +7 (913) … показать все
4. _{вт-вс 09:00–19:00}
3. 7/525 оценок
1. Идеал
2. просп. Ленина, 103
3. +7 (983) … показать все
4. _{ежедневно, 10:00–20:00}
4.6/513 оценок
1. MiniStudio
2. ул. Вяткина, 39
3. +7 (983) … показать все
4. _{ежедневно, 09:00–20:00}
4.4/56 оценок
1. Королева
2. ул. Авиаторов, 4
3. +7 (913) … показать все
4. _{пн-пт 08:00–20:00}
3.8/513 оценок
1. Celebritys
2. ул. Щетинкина, 26
3. +7 (3902)… показать все
4. _{ежедневно, 09:00–21:00}
3.6/511 оценок

1238на карте

Японская завивка волос в Москве – 9590 частных мастеров c ценами, фото и отзывами.

Срочно и недорого заказать услугу без посредников онлайн на YouDo

Японская завивка волос — что нужно знать?

Обратитесь к мастерам, зарегистрированным на Юду, если хотите иметь здоровые волосы и эффектные завитки. Наши специалисты имеют большой опыт работы с разными составами для завивки волос. Расценки на завивку зависят от длины волос и используемого препарата. Заказывайте услуги завивки волос в любое время. Профессионалы подберут наиболее благоприятный состав для ваших локонов.

Лечебный эффект

Если вы волнуетесь о здоровье волос, вам подойдёт щадящая завивка. Компоненты в составе продукта не повреждают локоны. Биозавивка – прогрессивное средство для создания шикарных кудряшек. С помощью химического лечебного состава мастер создаст прекрасную женскую причёску, не повреждая текстуру волос, а, напротив, ухаживая за ними. Японская завивка волос придаст не только форму, но и блеск прядям. Вы получите долговременный результат.

Специалисты выделяют преимущества лечебного состава:

содержание натуральных компонентов
восстановление структуры повреждённых волос
питание локонов

Проведение процедуры

Лечебная завивка волос уже много лет — на пике популярности. Лёгкие волны, крупные локоны или зигзаги на длинных или коротких волосах придадут вам неповторимый вид. Профессиональные исполнители используют комплексный подход к химической завивке. Он включает несколько процедур, дающих оздоровительный эффект для волос. Лучшие парикмахеры сделают причёску по оптимальной стоимости.

Этапы проведения процедуры:

консультация
накручивание волос
нанесение состава
снятие бигуди
ополаскивание
уход и сушка

Если вам нужна недорогая завивка волос в Москве, закажите помощь профессионалов Юду. Мастера быстро ответят и приедут в указанный час. Цена услуг исполнителей договорная.

специфические особенности и преимущества технологии

Химическая завивка была создана около века назад для того, чтобы упростить процедуру ежедневной укладки и получить долговременные локоны. Идея принадлежит парикмахеру Карлу Людвигу Нессерому из Германии. Позднее разработали новую технологию, которая позволяет получить крупные кудри и при этом не оказывает сильного вреда волосам. Японская химическая завивка получила огромную популярность и широко применяется. Многие девушки попробовали эту технологию на себе, и весьма довольны полученными результатами. Эффект от процедуры держится довольно долго, а после завивки волосы не становятся сухими и безжизненными.

Виды химической завивки волос

Современные парикмахеры предлагают немало различных видов завивки волос. Все их классифицируют по разным признакам на группы. Например, по типу используемых реактивов процедура может быть:

Щелочная. Такая технология дает очень стойкий результат, но очень вредит волосам.
Биозавивка. Позволяет не только получить упругие локоны, но и восстановить структуру волос.
Кислотная завивка. Мягко воздействует на пряди, но держится не так долго, как щелочная.
Нейтральная. Такая технология позволяет получить более долгий результат, чем кислотная, при этом не вредит волосам.

По виду бигуди завивки также различают. Можно накрутить пряди:

на коклюшки;
веллаформеры
папильотки;
спиральные коклюшки.

Японская химическая завивка предполагает использование крупных бигуди. По расположению фиксаторов на голове также различают круговую, вертикальную, горизонтальную завивку и методику двойного накручивания. При желании можно завить только хвост, пользоваться шапочкой, накрутить прикорневую часть волос или воспользоваться технологией для детей.

Отличия немецкой и японской технологий

Процедура, пришедшая с Азии, названа в честь косметологической компании, которая является ведущей в своей отрасли. Японская химическая завивка Goldwell Evolution объединяет в себе бережное воздействие на пряди и стойкий результат.

Представительницы прекрасного пола долгие годы применяют разные способы накручивания локонов. Сегодня разработано уже несколько десятков различных техник, среди которых мягкое и бережное воздействие на волосы, натуральные составы для фиксации. Однако такие технологии дают краткосрочный результат. В связи с этим женщинам либо приходится жертвовать состоянием волос, либо получать укладку всего на пару недель.

Японская химическая завивка разработана с учетом всех пожеланий. Женщинам предлагают теперь обрести упругие локоны на долгий срок, без видимых последствий для волос.

Если женщине хочется иметь красивые и упругие локоны, которые долго будут радовать ее своим потрясающим видом, то идеальным вариантом станет японская химическая завивка. Отзывы о ней самые положительные и восторженные, ведь технология представляет собой нейтральную безвредную укладку. Благодаря этому, данный способ завивки можно пробовать даже женщинам с ослабленными и поврежденными волосами после мелирования или осветления.

Японская завивка волос проводится с уникальным липидным комплексом, который оказывает комплексное воздействие на пряди:

восстанавливает изнутри структуру волосяного волокна;
оживляет шевелюру;
увлажняет волосы;
защищает от агрессивного воздействия внешней среды.

Преимущества японской химической завивки

Данная технология имеет ряд неоспоримых преимуществ, например:

Ее можно безопасно использовать на волосах после окрашивания, обесцвечивания, брондирования или мелирования.
С помощью японского метода удается надолго придать вид даже непослушным и жестким волосам.
В состав для завивки вводится специальное средство Maintain System, которое помогает сохранить пигмент волос после окрашивания.

Важные моменты

Японская химическая завивка, как и любая другая, должна начинаться с диагностики. Мастер в салоне обязательно оценивает состояние прядей, прежде чем приступить к процедуре. Если шевелюра в плохом состоянии, то парикмахер обязательно порекомендует сначала подлечить ее, а только потом делать укладку. Кроме того, важно выяснить состояние здоровья клиента. Аллергия, стресс, гормональный фон – все это может сделать завивку неэффективной.

Не стоит думать, что химическая завивка «крупные локоны» освободит вас от необходимости регулярно проводить укладку. Стилист обязательно подскажет, как быстро делать прическу по утрам.

Химическая завивка «крупные локоны»: технология

Сеанс занимает не более 30 минут, что является неоспоримым преимуществом технологии. Противопоказаний японская завивка волос практически не имеет, ведь в составе для фиксации присутствуют вещества для регенерации клеток и увлажнения.

Весь процесс делится на несколько этапов:

На шевелюру наносится специальный защитный состав, который предохраняет пряди от нежелательного повреждения.
Накладывают основной препарат для завивки.
Накручивают пряди на коклюшки.
Через 15 минут после этого наносится нейтрализатор жидкости.
После этого следует препарат для закрепления результата.
После снятия коклюшек, пряди дополнительно обрабатываются защитным средством.

Правила ухода за волосами после завивки

После проведения такой процедуры важно придерживаться определенных правил ухода за локонами. Например, не рекомендуется сушить волосы феном, расчесывать или укладывать сразу после сеанса. Кроме того, от мытья также стоит воздержаться на пару дней. В дальнейшем лучше использовать специальную косметику для ухода за локонами. Стилист может порекомендовать именно то, что подойдет для конкретного типа волос.

Японская биозавивка волос в Абакане

Параметры поиска

Японская биозавивка волос в Абакане: адреса компаний

107 организаций для ухода за волосами

1. Зазеркалье
2. просп. Ленина, 29
3. +7 (913) 44… показать все
4. _{ежедневно, 10:00–20:00}
3.8/56 оценок
1. Апрель
2. ул. Тараса Шевченко, 68
3. +7 (913) 44… показать все
4. _{ежедневно, 10:00–19:00}
4.5/512 оценок
1. Цирюльникъ
2. Торговая ул., 12
3. +7 (3902) 3… показать все
4. _{ежедневно, 09:00–21:00}
4.6/550 оценок
1. Парикмахерская
2. Пирятинская ул., 22
3. 4/57 оценок
1. Идеал
2. просп. Ленина, 103
3. +7 (983) 58… показать все
4. _{ежедневно, 10:00–20:00}
4.7/515 оценок
1. Роса
2. ул. Пушкина, 58
3. +7 (3902) 2… показать все
4. _{ежедневно, 09:00–19:00}
4.5/56 оценок
1. Золотой Мандарин
2. просп. Дружбы Народов, 39А
3. +7 (963) 26… показать все
4. _{ежедневно, 09:00–20:00}
4.4/514 оценок
1. Роса
2. ул. Пушкина, 113
3. +7 (3902) 2… показать все
4. _{ежедневно, 09:00–19:00}
4.2/57 оценок
1. Азалия
2. ул. Пушкина, 58
3. +7 (3902) 2… показать все
4. _{ежедневно, 09:00–19:00}
3.5/58 оценок
1. 7я
2. ул. Тельмана, 83
3. +7 (923) 59… показать все
4. _{ежедневно, 10:00–19:00}
4.4/516 оценок
1. Николь
2. ул. Маршала Жукова, 24
3. +7 (3902) 3. .. показать все
4. _{ежедневно, 08:30–19:00}
4.1/57 оценок
1. Сияние
2. ул. Гагарина, 40
3. +7 (3902) 3… показать все
4. _{ежедневно, 09:00–17:00}
4.2/58 оценок

12311на карте

что это, сколько держится, препараты, технология выполнения

Шелковистые ниспадающие локоны привлекают взгляды окружающих, но, к сожалению, не всех девушек природа наделила кучерявыми волосами. Для любительниц кудрей придумано огромное количество различных приспособлений — диффузор, плойки, утюжки, бигуди. Однако укладка с помощью этих инструментов недолговечна и сохраняет форму максимум до следующего мытья головы. Решить проблему стойкости кучеряшек помогает «химия», но агрессивные средства портят волосы. Что же предпринять тем, кто хочет иметь кудри, но боится за свои волосы? Ответ простой — нужно делать японскую химическую завивку.

Давайте узнаем, что это за процедура, её достоинства и недостатки, технологию выполнения, какие инструменты применяются и составы используются, можно ли сделать в домашних условиях.

Что такое японская завивка волос

Это метод холодного перманента, основанный на инновационной формуле применяемого препарата. Состав средства разрабатывался несколько лет, а после появления на рынке долгое время держался в секрете. Создала и запатентовала матричный метод завивки немецкая компания Goldwell, однако, широкую популярность этот способ приобрёл в Японии.

Узнав о новинке, концерн «Као» из Токио предложил «Голдвелл» провести совместные испытания препарата в своих лабораториях. В результате этих исследований и многочисленных экспериментов, средство было доработано до способности завивать даже азиатские волосы. Как известно, у коренных жителей Азии они прямые и очень жёсткие, поэтому плохо поддаются любому виду химической завивки, однако новый препарат не только создавал долговременные кудри, но и делал их структуру более гладкой и блестящей. Слухи о матричной «химии» быстро распространились среди модниц Японии и других азиатских стран.

Вскоре после произведённого фурора в области химической завивки, компания Goldwell интегрировалась в концерн «Као». После их слияния в Токио был создан исследовательский центр по изучению воздействия различных веществ на внутреннюю структуру волоса.

Преимущества

Японская «химия» хоть формально и относится к холодному виду завивки, но существенно отличается тем, что образование дисульфидных мостиков происходит в матриксе волоса без нарушения хрупкой водородной связи в кутикулярном слое. Благодаря этому у японского метода завивки большое количество преимуществ.

Лёгкость выполнения.
Первоначальная форма и интенсивность завитка не меняется с течением времени.
Длительность эффекта сохраняется от полугода.
Делать укладку после японской завивки можно как угодно — плойками, бигуди, на брашинг.
Входящий в состав препарата кератин оздоравливает волосы, встраиваясь в повреждённые участки кортекса.
Для японской химической завивки не нужны специальные бигуди, её можно делать стайлерами любой формы и диаметра.
Подходит для работы с обесцвеченными, подвергавшимися кислотной смывке и химической завивке волосами.
Не требует дополнительных приспособлений.
Не меняет цвет окрашенных волос.
После «химии» нет неприятного запаха.
Тонирование или окрашивание можно производить непосредственно перед процедурой японской завивки, поскольку содержащийся в препарате кератин запечатывает цвет внутри волоса и предотвращает его вымывание.
Не нарушает водно-щелочной баланс и поэтому не требует дополнительного увлажнения.
Подходит для завивки наращённых волос.

Японская завивка придаёт локонам блеск, здоровый вид. А благодаря аминокислотному комплексу волосы в процессе процедуры не теряют влагу.

Недостатки

Несмотря на все преимущества и питательные вещества в матричных препаратах, у них есть и ряд недостатков, которые нужно учитывать при выборе метода завивки.

Нельзя делать чаще двух раз в год.
Высокая цена процедуры — матричные препараты очень дорогие.
Нужен дополнительный уход после завивки.
Продолжительность процедуры от 2 до 5 часов (зависит от длины и густоты волос).
Чтобы убрать надоевшие или отросшие кудри нужна дополнительная процедура по выпрямлению. Матричную «химию» полностью удалить можно только японским перманентным выпрямлением, воздействующим также на квазиматриксные частицы волоса.

Если завивку запланировано сделать в салоне красоты, то обязательно поинтересуйтесь у парикмахера, каким именно препаратом он будет работать. Тщательно изучите состав средства на официальном сайте производителя, поскольку в целях экономии, мастера часто выдают более дешёвые аминокислотные препараты за дорогие матричные средства.

Противопоказания и ограничения

Матричные препараты имеют в своём составе натуральные компоненты, которые оказывают мягкое воздействие. Поэтому особых противопоказаний японская завивка волос не имеет. Перед процедурой нужно руководствоваться общими рекомендациями.

Запрещено делать «химию» в период гормональных изменений в организме — беременность, грудное вскармливание, критические дни, сбои в работе щитовидной железы.
Учитывать индивидуальную непереносимость компонентов препарата.
Не делать, если есть повреждения и очаги воспаления на кожном покрове головы, в период активного выпадения волос, а также подросткам до 18 лет.

Перед процедурой рекомендуется провести тест на чувствительность кожи к препарату. Если возникли признаки аллергических реакций, то сразу же смыть химический состав и принять антигистаминное средство. Не допускать попадания лосьона на слизистую оболочку.

Применяемые инструменты, средства и препараты

Для того чтобы сделать японскую завивку волос нужны такие же инструменты, что и для других видов холодной «химии». Прежде чем приступить к процедуре проверьте наличие следующих приспособлений:

стайлеры для накручивания;
бумага для завивки;
водонепроницаемые перчатки и пеньюар;
полотенца;
пластмассовая расчёска с тонким хвостиком;
поролоновая губка;
миска.

Помимо инструментов и лосьона, для завивки понадобятся следующие вспомогательные средства:

шампунь глубоко очищения;
кератиновый шампунь;
бальзам.

Мытьё волос кератиновым шампунем после процедуры матричной завивки — обязательное условие, которое необходимо соблюдать. Молекулы кератина закрепляют получившиеся завитки.

Принцип работы препаратов для японской завивки основан на создании дисульфидной связи в глубоких слоях волоса. Средство попадает в матрикс, не поднимая кутикулы, а затем создаёт пустоты в межклеточном веществе, раздвигая квазиматриксные частицы, и встраивается в освободившиеся участки. После того как молекулы препарата заняли своё место, они начинают образовывать заданное направление и форму завитка.

В состав лосьонов для японской завивки входят следующие компоненты.

Коллаген — природное вещество, отвечающее за эластичность. Без него волосяная колба не могла бы менять форму и просто рвалась при малейшем изгибе.
Экстракт чайных листьев — питательный компонент, который поддерживает целостность структуры волоса.
Кератиновый комплекс из аминокислот.
Бетаин — укрепляет внешний чешуйчатый слой.
Протеины пшеницы — питают и поддерживают здоровый блеск.
Кремний-цистин — активное вещество, создающее дисульфидную связь для придания формы локонам.
Лецитин — удерживающий влагу агент.
Липидный комплекс — защищает волосы от перепада температур и ультрафиолета.

Все средства, применяемые для японской завивки сходны по своему составу и принципу воздействия на волосы.

Технология выполнения

Прежде чем приступить к выполнению японской завивки, нужно провести диагностику кожного покрова головы. Если есть царапины, воспаления или иные повреждения, то следует отложить процедуру до полного восстановления целостности эпидермиса.

Технология выполнения японской завивки волос ничем не отличается от других способов холодного перманента.

Промыть волосы шампунем глубокого очищения 2–3 раза, чтобы удалить все поверхностные загрязнения, которые препятствуют проникновению лосьона внутрь.
Разделить волосы проборами и накрутить их на стайлеры.
Нанести препарат для завивки, выдержать нужное время и смыть тёплой водой, не снимая коклюшки.
Промокнуть полотенцем, нанести нейтрализатор на указанное в инструкции время и снять стайлеры.
Смыть нейтрализатор кератиновым шампунем и обработать бальзамом.

Первую укладку после завивки нужно сделать феном с насадкой «диффузор» для того, чтобы локоны приняли заданную форму.

Японская матричная завивка волос

Особенности накрутки на волосы разной длины

Японская завивка — универсальная процедура, которая подходит для волос разной длины. С её помощью легко корректируется форма лица, поскольку этот метод «химии» не ограничивает выбор стайлеров для накручивания. Средства для японской завивки разработаны таким образом, что длина волос не влияет на качество получаемого завитка.

Давайте узнаем способы накрутки волос разной длины.

Японская завивка на короткие волосы делается с помощью коклюшек среднего или мелкого диаметра. Крупные бигуди не подходят, поскольку не будет видно завиток. На стрижки с коротко выстриженными височными и нижнезатылочной частью, японская «химия» делается путём горизонтальной накрутки теменной и верхнезатылочной зон. Для стрижек типа «боб-каре» и «каре» подходит только вертикальный или спиральный способ крепирования бигуди.
Японская завивка на средние волосы делается стайлерами любой формы. Метод накрутки выбирается с учётом фасона стрижки. Для волос, остриженных под одну длину, накручивают вертикальным или спиральным способом. «Каскад» может накручиваться любым методом, в зависимости от того, какую форму завитка нужно получить.
Японская химическая завивка на длинные волосы делается разными способами, однако, горизонтальный метод накрутки будет образовывать лишь лёгкую волну. Вертикальная накрутка даёт упругий завиток с чёткой текстурой. Для придания визуального объёма длинным и тонким волосам их накручивают на спиральные коклюшки среднего диаметра.
Японская завивка волос крупными локонами получается путём крепирования прядей на толстые бигуди. Для эффекта естественных кудрей накрутка делается в разных направлениях.

Японская завивка в домашних условиях

Выполнить японскую химическую завивку в домашних условиях, возможно, если не нарушать технологию проведения и время выдержки препарата. А также соблюдать простые правила.

Набор для «химии» нужно заказывать только на официальном сайте производителя, чтобы не купить подделку.
Средства с повреждённой упаковкой или с истекшим сроком годности использовать категорически запрещено.
Убедитесь в том, что помещение для проведения завивки хорошо проветривается.

Следуя этим простым советам и соблюдая технологию, можно сделать японскую «химию» самостоятельно, не хуже, чем в салоне красоты.

Последующий уход

Для ухода за волосами после японской завивки нужен кератиновый шампунь и такой же бальзам. А также продлить срок ношения кудрей помогает кератиновая маска, если делать её регулярно раз в неделю. Средства, содержащие кератин, поддерживают форму локонов, сохраняют их блеск и мягкость.

Если не ухаживать за волосами после процедуры, то завитки быстро потеряют чёткую текстуру.

Применение кератиновой маски

Сколько держится японская завивка

Заявленная производителями длительность сохранения эффекта от процедуры — 6 месяцев. Однако то, сколько времени будет держаться японская завивка, зависит от нескольких условий.

Состояние волос. Повреждённая структура хуже сохраняет форму.
Уход после завивки. Отсутствие кератиновых средств сокращает время накрученного эффекта.
Соответствие препарата типу волос. Если завивка сделана средством меньшей концентрации, чем того требуют волосы, то «химия» будет слабой и недолговременной.

Как удалить японскую завивку с волос? Для этого нужна специальная процедура перманентного выпрямления «Голдвелл», которая воздействует на те же межклеточные частицы при разрушении дисульфидной связи. Все поверхностные средства для выпрямления малоэффективны при работе с волосами, обработанными матричным составом.

В заключение подытожим — японская химическая завивка волос — это долговременная укладка, основа которой препарат, создающий завиток путём растягивания дисульфидной связи. Её плюсы в том, что волосы не теряют жизненную силу и долго сохраняют форму. Японскую «химию» можно сделать самостоятельно в домашних условиях, при соблюдении технологии и времени выдержки составов. После процедуры важно не забывать правильно ухаживать за волосами.

Японская химическая завивка

HAHONICO SPAT Японская биозавивка для волос, 1500 грн. — Kidstaff

Подробное описание: HAHONICO SPAT Японская биозавивка для волос

Милые дамы представляю не имеющую аналогов японскую биозавивку волос!

ЗАПИСЬ ПО ТЕЛ. 067 683 48 29 Людмила.

Благодаря инновационной формуле препарата на основе цистеамина, тиоглицерина и аргинина комплекс HAHONICO SPA´T позволяет завивать волосы всех типов на длительный период.

Даже клиенты с блондированными и поврежденными волосами останутся довольны процедурой и внешним видом волос. Использование в составе препарата аргинина – одной из структурных аминокислот белка, позволяет увлажнить и придать блеск волосам.

1. Препараты комплекса для завивки Hahonico SPA´T Seven не содержат губительные формальдегиды, альдегиды и подобные им вещества, которые оказывают негативное влияние на здоровье человека, загрязняют окружающую среду и являются строго запрещенными Министерством здравоохранения Японии для использования в составе косметических средств для волос в любом количестве.

2. Действие препаратов комплекса Hahonico SPA´T Seven базируется на основе формулы инновационного сочетания цистеамина, тиоглицерина и аргинина, что позволяет сохранить здоровый вид волос непосредственно во время процедуры и в дальнейшем.

3. Препараты комплекса имеют нейтральную основу PH — 7, что дает возможность применять комплекс для завивки тонких, поврежденных и даже блондированных волос.

4. При применении препаратов комплекса отсутствует неприятный запах, свойственный препаратам на основе аммиака (щелочные средства для завивки) и тиогликолевой кислоты (кислотные средства для завивки). Неприятный запах также отсутствует при последующем мытье волос в домашних условиях.

5. В состав препаратов входит аргинин – одна из структурных аминокислот белка, который содержится в составе волос. Аргинин придает волосам шелковистость и блеск.

6. В отличие от щелочных и кислотных средств, лосьон для завивки Hahonico SPA´T Seven не утяжеляет волосы и не имеет пагубного влияния на состояние волос и кожи головы.

7. Оптимально подобранный состав препаратов дает возможность получить как натуральные нежные локоны, так и упругие завитки.

8. Действие препаратов комплекса не влияет на цвет волос.

9. Возможно использование препаратов Hahonico SPA´T Seven на предварительно завитые волосы препаратами для завивки на щелочной и кислотной основах.

стоимость процедуры от 1000 грн. (зависит от длины и густоты волос)

ЗАПИСЬ ПО ТЕЛ. 067 683 48 29 Людмила.

или пишите в теме.

ПОДПИСЫВАЙТЕСЬ НА ПРОДАВЦА, чтобы не потеряться.

Ссылка на домашнюю систему ухода за волосами HAHONICO — https://www.kidstaff.com.ua/tema-2698185.html

Ссылка на нано-реконструкцию волос от HAHONICO — https://www.kidstaff.com.ua/tema-2721208.html

Фокус превращается в быстрорастущие медицинские компании с малой капитализацией

THE BUSINESSOFCAPITAL «SINCE 1 8 4 3 » » 19 января 2004 г. www.wallstreetreporter.com ИНТЕРВЬЮ ГЕНЕРАЛЬНОГО ДИРЕКТОРА Ларри Хесn II президентом и генеральным директором Curon Medical AS NASDAQ / CURN Патрик Джонсон президент и исполнительный директор Директор Pro-Dex, Inc. NASDAQ / PDEX Чарльз А. Грин Главный исполнительный директор Medical Solutions plc LSE / MLS Марк Тродаль Главный исполнительный директор Bespak plc LSE / BPK Гилберт Акерманн Главный исполнительный директор Straumann Group AG SWX / STMN Аллан Д. Хедрик Президент и главный исполнительный директор IntraLuminal Therapeutics Private Equity 9 Питер М. фон Дайк Основатель, президент и главный исполнительный директор Zassi Medical Evolutions, Inc. Private Equity 35 C. Рэймонд Ларкин-младший Председатель и главный исполнительный директор Eunoe, Inc. Private Equity Келли Олсен Президент Tahitian Noni International Private Equity 18 20 23 Брэдфорд Э. Сифф Председатель, президент и главный исполнительный директор Biowave Corporation Private Equity 25 Дэниел П.Вермелинг, Pharm.D. Старший вице-президент и главный операционный директор Intranasal Technology, Inc. Private Equity 29 Эфраим Хеллер Председатель и главный исполнительный директор AngioScore, Inc. Private Equity 12 16 32 39 42 ФОКУС НА АКЦИЯХ МЕДИЦИНСКИХ ТЕХНОЛОГИЙ ФОРУМ КРУГЛОГО СТОЛА Фокус превращается в быстрый—растущий небольшой—количество >мед—технические фирмы крупная капитализация медицинскиеикал технические stocks показали очень хорошие результатыmed за последний год, но в то время как небольшие компании догнали to в некоторой степени они все еще отстают от своих более крупных конкурентовпо сравнению с. Где самые богатые возможности чтобы найти? Спооктября 2003 г. журнал Wall Street Reporter Magazine провел круглый стол медицинскихтехнологий, посвященный инвестиционным возможностям в этом секторедля р. Патрик Л. Джонсон Президент и главный исполнительный директор Pro-Dex, Inc. Кристофер С. Кули, старший аналитик CFA и вице-президент FTN Midwest Research Уильям Дж.Плованик, директор CFA First Albany Участие с Уолл-стрит: Ян Вальд, аналитик по медицинским инструментам в AG Edwards & Sons; Крис Кули, аналитик медицинских товаров в FTN Midwest Research; и Билл Плованик, медицинскийаналитик по оборудованию и расходным материалам в First Albany. Конкретные раскрытия информации по каждому обсуждаемому вопросу можно найти в недавних отчетах аналитиков; Доступен по запросу. От корпоративного секдо участия: Брэд Сифф, председатель, генеральный директор и президент Biowave Corp. ; Патрик Джонсон, президент и главный исполнительный директор Pro-Dex Inc.; и Питер Гомбрич, председатель и главный исполнительный директор Molecular Diagnostics Inc. (цена закрытия указана по состоянию на 31 октября 2003 г.) WSR: Билл, не могли бы вы начать обсуждение? Есть ли какие-либо особенно интересные области с точки зрения новых исследований, новых продуктов и важных вещей, происходящих в компаниях, за которыми вы следите? ПЛОВАНИК: На самом деле, наше освещение довольно сфокусировано. Я рассказываю об ортопедии и нейтрофиле, — Питер Гомбрич, основатель, председатель и главный исполнительный директор Molecular Diagnostics Брэдфорд Э.Сифф, магистр технических наук, председатель MBA, президент и главный исполнительный директор Biowave Corp. Ян Дэвид Уолд Вице-президент по исследованиям ценных бумаг AG Edwards & Sons в технологических компаниях, и если вы взгляните в будущее, куда идут захватывающие исследования (по крайней мере, в моем освещении sectors), они более ориентированы на нейротехнологии сильные >нологические имена. Эти устройства используют технологию, подобную кардиостимулятору; они пытаются устранить неудовлетворенные клинические потребности и решить некоторые проблемы с этими устройствами.Таким образом, мы считаем, что у этих имен есть большие возможности с точки зрения рыночных возможностей. WSR: Патрик из Pro-Dex Inc. (NAS-DAQ: *PDEX $1,62), не могли бы вы вкратце рассказать о своей компании? Вы много работаете с миниатюрными моторами и устройствами управления движением. Где вы видите интересные вещи в это время? ДЖОНСОН: У нашей продукции есть две дочерние компании. Во-первых, Micro Motors, которая специализируется на разработке и производстве миниатюрных систем вращательного привода (в основном используемых в медицинских и стоматологических ортопедических наконечниках).Во-вторых, это наша дочерняя компания Oregon Microsystems (OMS), которая специализируется на встроенном многоосевом управлении движением. Это основные

Обзор технологий

[74] Masuda Y, Kimura H, Liang X, Gao X, Mogensen RM, Andersen T. Относительно

BBDB волновой электростанции. В: Труды 2nd European Wave

Power Conference; 1995. с. 69–76.

[75] Энергия океана. Доступно в Интернете по адресу: http://www.oceanenergy.ie/ [доступ

20.10.2009].

[76] Washio Y, Osawa H, Nagata Y, Fujii F, Furuyama H, Fujita T. Морское

волновое силовое устройство плавучего типа «Mighty Whale»: испытания в открытом море. В: Pro-

протоколы 10-й Международной морской полярной инженерной конференции, Сиэтл,

; 2000, т.1, с. 373–80.

[77] ДТИ. Прибрежная плавучая колеблющаяся водяная колонна: разработка прототипа

и оценка. Респ. УРН 05/581; 2005. Доступно в Интернете по адресу: http://

www.berr.gov.uk/files/file17347.pdf.

[78] Лай Дж. Л., Браун Д. Т., Джонсон Ф. Исследование нелинейных эффектов

, возникающих в результате воздушных подушек в устройстве Orecon с колеблющимся водяным столбом (OWC)

. В: Материалы 28-й Международной конференции по морским шельфам

Arctic Engineering, Гонолулу, Гавайи; 2009 [статья №. ОМАЕ2009-79115].

[79] Хирохиса Т. Морские испытания поглотителя волнового буя. В: Berge H, редактор

. Материалы 2-го Международного симпозиума по использованию волновой энергии,

, Тронхейм, Норвегия; 1982, с.403–17.

[80] Budal K, Falnes J, Iversen LC, Lillebekken PM, Oltedal G, Hals, et al. Проект

Норвежского буя с волновым двигателем. В: Берге Х, редактор. Материалы 2-го Международного симпозиума

по использованию энергии волн, Тронхейм, Норвегия;

1982, с. 323–44.

[81] Нильсен К., Смед П.Ф. Точечный поглотитель — оптимизация и тестирование на выживаемость. В:

Материалы 3-й Европейской конференции по энергии волн; 1998. с. 207–14.

[82] Waters R, Stalberg M, Danielsson O, Svensson O, Gustafsson S, Stromstedt E,

et al.Экспериментальные результаты морских испытаний системы морской энергии волн.

Appl Phys Lett 2007; 90(3) [Арт. № 034105].

[83] Элвуд Д., Шахер А., Райнфранк К., Пруделл Дж. , Йим С., Амон Э. и др. Численное моделирование

и испытания в океане волнового энергетического устройства с прямым приводом, использующего линейный генератор

с постоянными магнитами для отбора мощности. В: Труды

28-й Международной конференции по морской технике в Арктике, ASME,

Гонолулу, Гавайи; 2009 [Документ №ОМАЕ2009-79146].

[84] Falnes J. Преобразование волновой энергии посредством относительного движения между

двумя одномодовыми колеблющимися телами. J Offshore Mech Arctic Eng 1999;121:

32–8.

[85] Корде ЮА. Системы реактивно нагруженных связанных колеблющихся тел в волновом

преобразовании энергии. Appl Ocean Res 2003; 25: 79–91.

[86] Битти С.Дж., Бакхэм Б.Дж., Уайлд П. Настройка частотной характеристики для преобразователя энергии волн пучения

с двумя телами. В: Материалы 18-й Международной офф-

береговой полярной инженерной конференции; 2008.п. 342–8.

[87] Ferdinande V, Vantorre M. Концепция двудольного точечного поглотителя. In:

Evans DV, Falca

˜o AF de O, редакторы. Гидродинамика использования энергии океанских волн

. Берлин: Спрингер; 1986. с. 217–26.

[88] Норен С.А. Установка для использования кинетической энергии. патент США № 4277690; 1981

[Исходный патент Швеции № 7808679; 1978].

[89] Норен С.А. Аппарат для рекуперации кинетической энергии морских волн. Патент США

№.4773221; 1988 [Первоначальный патент Швеции № 8104407; 1981].

[90] Cleason L, Forsberg J, Rylander A, Sjo

¨stro

¨m BO. Вклад в теорию и

опыт производства и передачи энергии от буй-концепции.

В: Материалы 2-го Международного симпозиума по использованию энергии волн;

1982. с. 345–70.

[91] Вайнштейн А., Фредриксон Г., Паркс М.Дж., Нильсен К. AquaBuOY, морская волна

преобразователь энергии численное моделирование и оптимизация.В: Материалы конференции

MTTS/IEEE Techno-Ocean’04, Кобе, Япония; 2004, том. 4, с. 1854–

59.

[92] Солтер С.Х., Лин С.П. Измерения эффективности широкого резервуара на модели наклонного буя IPS

. В: Материалы 3-й Европейской конференции по энергии волн;

1998. с. 200–6.

[93] Пейн Г.С., Тейлор Дж.Р.М., Брюс Т., Паркин П. Оценка метода граничных элементов

для моделирования свободно плавающего наклонного волнового энергетического устройства. Часть 1:

Численное моделирование.Ocean Eng 2008; 35: 333–41.

[94] Пейн Г.С., Тейлор Дж.Р.М., Брюс Т., Паркин П. Оценка метода граничных элементов

для моделирования свободно плавающего наклонного волнового энергетического устройства. Часть 2:

Экспериментальная проверка. Ocean Eng 2008; 35: 342–57.

[95] Вебер Дж., Моувен Ф., Пэрриш А., Робертсон Д. Вейвбоб — сеть исследований и разработок

и инструменты в контексте системной инженерии. В: Proceedings of

ings of 8th European Wave Tidal Energy Conference; 2009.п. 416–20.

[96] Прадо М. Волны Архимеда (AWS). В: Круз Дж, редактор. Океанская волна

энергии. Берлин: Спрингер; 2008. с. 297–304.

[97] Гарднер FE. Учебный опыт испытаний пилотной установки AWS на шельфе Португалии. В:

Материалы 6-й Европейской конференции по энергии волн; 2005. с. 149–54.

[98] Солтер С. Оглядываясь назад. В: Круз Дж, редактор. Энергия океанских волн. Берлин: Спрингер;

2008. с. 7–39.

[99] Pizer DJ, Retzler C, Henderson RM, Cowieson FL, Shaw MG, Dickens B, Hart R.

Pelamis WEC — последние достижения в программе численного и экспериментального моделирования

. В: Материалы 6-й Европейской конференции по приливной энергии волн;

2005. с. 373–8.

[100] Йемм Р. Пеламис. В: Круз Дж, редактор. Энергия океанских волн. Берлин: Спрингер;

2008. с. 304–21.

[101] Маккормик М.Е., Муртаг Дж., Маккейб П. Крупномасштабное экспериментальное исследование системы преобразования волновой энергии навесной баржи

. В: 3rd European Wave

Energy Conference; 1998.

стр. 215–22.

[102] French MJ, Bracewell R. Поглотители точки подъема, реагирующие на внутреннюю массу

. В: Evans DV, Falca

˜o AF de O, редакторы. Гидродинамика океанских волн

Использование энергии. Берлин: Спрингер; 1986. с. 247–55.

[103] Корде ЮА. Об обеспечении реакции эффективного поглощения энергии волн

плавсредствами. Appl Ocean Res 1999; 21: 235–48.

[104] Маккейб А.П., Брэдшоу А., Видден М.Б., Чаплин Р.В., Френч М.Дж., Медоукрофт

JAC.PS Frog Mk5: морской точечный преобразователь энергии волны. В:

Материалы 5-й Европейской конференции по энергии волн; 2003. с. 31–7.

[105] McCabe AP, Bradshaw A, Meadowcroft JAC, Aggidis G. Развитие конструкции

преобразователя волновой энергии PS Frog Mk 5. Возобновляемая энергия

2006; 31:141–51.

[106] Бабарит А., Клеман А.Х., Жиллото Дж.К. Оптимизация и моделирование во временной области преобразователя волновой энергии SEAREV. В: Материалы 24-й Международной конференции по морской механике Arctic Engineering, Халкидики, Греция;

2005, том.2, с. 703–12.

[107] Сальседо Ф., Руис-Мингуэла П., Родригес Р., Риччи П., Сантос М. Oceantec: морские

испытания прототипа в четверть масштаба. В: Материалы 8-й Европейской конференции по энергии волн

приливной энергии; 2009. с. 460–5.

[108] Перес Т., Сантос-Мухика М., Руис-Мингела Дж.П.

Анализ производительности и схема управления гироскопическим преобразователем волновой энергии. В: Труды

European Control Conference 2009; 2009. с. 3743–8.

[109] Солтер С.Х.Качающаяся булава. В: Материалы семинара Wave Energy

R&D, Корк, Ирландия; 1992 г., Европейская комиссия, отчет EUR 15079EN, с. 197–

206.

[110] Whittaker T, Collier D, Folley M, Osterried M, Henry A, Crowley M. Разработка

Oyster — преобразователя энергии пульсирующих волн на мелководье.

Материалы 7-й Европейской конференции по энергии приливов и приливов, Порту, Португалия,

, 2007 г.

[111] WaveRoller. Доступно в Интернете по адресу: http://www.aw-energy.com/index.php/

waveroller.html [дата обращения: 20.10.2009].

[112] Folley M, Whittaker TJT, van’t Hoff J. Конструкция малых преобразователей волновой энергии

с шарнирным соединением на дне. В: Труды 7-й Европейской конференции

Волны приливной энергии; 2007.

[113] Lendenmann H, Strømsem K-C, Dai Pre M, Arshad W, Leirbukt A, Tjensvoll G,

Gulli T. Преобразователи волновой энергии прямой генерации для оптимизации производства электроэнергии.В: Материалы 7-й конференции European Wave Tidal Energy

; 2007.

[114] Волновая Звездная Энергия. Доступно на сайте: http://www.wavestarenergy.com/

[дата обращения: 20.10.2009].

[115] Estefen SF, Esperanc¸a PTT, Ricarte E, Costa PR, Pinheiro MM, Clemente CH, et

al. Экспериментальные и численные исследования гипербарического устройства волновой энергии

для производства электроэнергии. В: Материалы 27-й Международной конференции

Морская механика Arctic Engineering, Эшторил, Португалия; 2008 [статья №.

OMAE2008-57891].

[116] Мехлум Э. Тапчан. В: Evans DV, Falca

˜o AF de O, редакторы. Гидродинамика

использования энергии океанских волн. Берлин: Спрингер; 1986. с. 51–5.

[117] Грав КУ. Eine Einfu

¨hrung in die Nutzung der Wellenenergie, Universita

¨t

Лейпциг; 2004. Доступно на сайте: http://www.uni-leipzig.de/grw/welle/

wenergie_3_80.html#zwei.

[118] Kofoed JP, Frigaard P, Friis-Madsen E, Sørensen HC.Тестирование прототипа преобразователя волновой энергии

Wave Dragon. Возобновляемая энергия 2006;31:181–9.

[119] Маргеритини Л., Вичинанца Д., Фригаард П. Гидравлические характеристики морской волны

Экспериментальная установка щелевого генератора в Квитсёй (Норвегия). В: Труды 7-й Европейской конференции по энергии приливов и приливов

; 2007.

[120] Вичинанца Д. , Фригаард П. Волновое давление, действующее на щелево-конусный генератор морской волны

. Прибрежная инженерия 2008; 55: 553–68.

[121] Солтер С.Х., Тейлор Дж.Р.М., Колдуэлл, штат Нью-Джерси.Механизмы преобразования мощности в энергию волны

. Proc Inst Mech Eng Part M J Eng Maritime Environ 2002; 216: 1–27.

[122] Уэллс А.А. Поворотный преобразователь с гидравлическим приводом. Спецификация патента Великобритании № 1595700;

1976.

[123] Whittaker TJT, Wells AA. Опыты с гидропневматическим волновым устройством

. В: Труды симпозиума по волнам и приливам, Кентербери, Великобритания; 1978

[документ B4].

[124] Рагунатан С. Воздушная турбина Уэллса для преобразования энергии волн.Prog

Aerospace Sci 1995; 31: 335–86.

[125] Карран Р., Гато LMC. Характеристики преобразования энергии нескольких типов конструкций турбин

Wells. Proc Inst Mech Eng Part A J Power Energy

1997; 211:133–45.

[126] Falca

˜o AF de O. Управление волновой электростанцией с

максимальной выработкой энергии. Appl Ocean Res 2002; 24: 73–82.

[127] Gato LMC, Falca

˜o AF de O. Аэродинамика турбины Уэллса: управление

качающимися лопастями ротора.Int J Mech Sci 1989; 31: 425–34.

[128] Gato LMC, Ec¸a LRC, Falca

˜o AF de O. Характеристики турбины Wells с

лопастями ротора с переменным шагом. Trans ASME J Energy Resour Techn 1991;

113:141–6.

[129] Taylor JMR, Колдуэлл, штат Нью-Джерси. Проектирование и изготовление воздушной турбины с регулируемым шагом

для Азорской волновой электростанции. В: Труды 3-й Европейской конференции по волновой энергии

; 1998. с. 328–37.

[130] Бабинстен И.А.Устройство для преобразования энергии морских волн в электрическую

энергию. патент США №3922739; 1975.

[131] Сетогучи Т., Сантакумар С., Маэда Х., Такао М., Канеко К. Обзор импульсных турбин

для преобразования волновой энергии. Возобновляемая энергия 2001;

23:261–92.

[132] Scuotto M, Falca

˜o AF de O. Колодцы и импульсные турбины в волне ВНК

электростанции: сравнение. В: Труды 6-й Европейской энергетической конференции Wave Tidal

; 2005.п. 463–9.

[133] Карран Р., Деннисс Т., Боак С. Многопрофильный дизайн для повышения производительности:

преобразование энергии океанских волн. В: Труды 10

International Offshore

Polar Engineering Conference, Сиэтл; 2000, том. 1, стр. 434–41.

А.Ф.О. Falca

˜o / Обзоры возобновляемых и устойчивых источников энергии 14 (2010) 899–918

917

Frontiers | Ацибензолар-S-метил систематически активирует устьичную защиту японской редьки

Введение

Недавно несколько бактериальных патогенов были идентифицированы как возбудители тяжелых мировых эпидемий. Pseudomonas cannabina pv. alisalensis ( Pcal ) вызывает бактериальный ожог растений крестоцветных (растения Brassicaceae; Takikawa and Takahashi, 2014) и наносит большой ущерб выращиванию крестоцветных, включая капусту, пекинскую капусту и японскую редьку. На редьке японской симптомы болезни, вызванные вновь выделенным штаммом Pcal , наблюдались на листьях и корнях (Takikawa and Takahashi, 2014). Обесцвечивание корней и некротические поражения листьев имеют серьезные последствия для коммерческой ценности японской редьки.Химические обработки, такие как медные фунгициды и антибиотики, являются популярными стратегиями борьбы с бактериальными заболеваниями. Однако было обнаружено штаммов Pcal , устойчивых к этим химическим веществам (Takahashi et al., 2013). Таким образом, спрос на разработку устойчивых альтернативных стратегий растет.

Ацибензолар-S-метил (АСМ), синтетический аналог салициловой кислоты (СК), использовался для защиты сельскохозяйственных культур от ряда болезней путем активации защиты растений (Kunz et al., 1997; Oostendorp et al., 2001). Мы продемонстрировали, что замачивание почвы с ASM вызывало системную приобретенную устойчивость (SAR) против Pcal у капусты (Ishiga et al., 2020). Процессы SAR можно разделить на три этапа: локальная иммунная активация, передача информации от локальных к системным тканям с помощью мобильных сигналов и активация и прайминг защиты в системных тканях (Jung et al. , 2009; Shah and Zeier, 2013; Wang et al. , 2018). Таким образом, наши предыдущие результаты подразумевают, что мобильные сигналы, генерируемые ASM-триггером SAR в необработанных листьях.Предварительная обработка первых листьев растения огурца АСМ защищала целые растения от грибковой инфекции Colletotrichum orbiculare (Cools and Ishii, 2002). У растений огурца генов SAR быстро и сильно экспрессировались в верхних листьях после обработки первого листа ASM (Narusaka et al., 1999, 2001; Cools and Ishii, 2002). Однако механизм SAR, вызванный ASM, до сих пор не ясен. Мы также продемонстрировали, что ASM защищает растения капусты от Pcal , активируя защиту на основе устьиц (Ishiga et al., 2020). Кроме того, ASM индуцирует экспрессию маркерных генов SAR, включая PR1 , PR2 и PR5 , в растениях капусты (Ishiga et al., 2020). Кроме того, поскольку многие лиственные бактериальные патогены нацелены на устьица как на место проникновения, ожидается, что ASM будет иметь мощный эффект борьбы с болезнями. Однако эффективность ASM в подавлении развития болезни против Pcal на других культурах (помимо капусты) не оценивалась.

Производство АФК на клеточной поверхности, которое называется окислительным взрывом, является одной из самых ранних защит, обнаруживаемых во время иммунитета, запускаемого патоген-ассоциированным молекулярным паттерном (PAMP) (PTI), и иммунитета, запускаемого эффектором (ETI).Doke (1983) впервые продемонстрировал, что члены АФК, возможно, функционируют как химические сигналы, необходимые для индукции реакции гиперчувствительности (HR). Окислительный взрыв, вызванный сигналами патогенов, необходим для защитных механизмов всего растения (Fobert and Després, 2005). Апопластные АФК образуются из NADPH-оксидаз, локализованных в плазматической мембране, и пероксидаз, локализованных в клеточной стенке (Zhao et al., 2019). АФК известны как антимикробные молекулы, участвующие в укреплении клеточной стенки и отложении каллозы.АФК также действуют как локальные и системные вторичные мессенджеры, запускающие дополнительные иммунные реакции, включая движение устьиц. Закрытие устьиц в ответ на различные стрессы вызывается потерей тургора замыкающих клеток, что обусловлено модуляцией ионных каналов (Thor et al., 2020; Wu et al., 2020). Сложная сигнальная сеть, включающая продукцию АФК, регулирует эти каналы (Kim et al., 2010; Kollist et al., 2014). Обработка АСМ первых листьев посредством инокуляции грибком вызвала быстрое накопление H ₂ O ₂ ниже места проникновения на необработанных АСМ третьих листьях (Lin and Ishii, 2009; Park et al., 2019). Эндогенный SA необходим как для продукции апопластных АФК, так и для закрытия устьиц, индуцируемого хитозаном в виде молекулярных паттернов, связанных с микробами (MAMPs; Prodhan et al., 2017). Поскольку ASM является синтетическим аналогом SA, заманчиво предположить, что закрытие устьиц, вызванное ASM, тесно связано с продукцией ROS.

Здесь мы демонстрируем, что ASM успешно подавляет развитие болезни и размножение бактерий в японской редьке, активируя защиту устьиц. Кроме того, чтобы узнать о механизме действия АСМ на устьица, мы исследовали его влияние на продукцию АФК.ASM активировал продукцию АФК, опосредованную пероксидазами, которые, в свою очередь, активировали защиту на основе устьиц. Более того, ASM также индуцировал экспрессию гена PR на японской редьке. Важно отметить, что ASM контролировал бактериальный ожог японской редьки не только на обработанных листьях, но также на верхних и нижних листьях. Таким образом, наши результаты убедительно подтверждают, что ASM может быть дополнительным инструментом борьбы с болезнями для предотвращения потерь урожая от бактериальных патогенов.

Материалы и методы

Растительные материалы и химическая обработка

Редька японская ( Raphanus sativus var. longipinnatus ) cv. Во всех экспериментах использовали растения Нацуцукаса. Проростки выращивали в горшках диаметром 9 см при 24°С с интенсивностью света 200 мкмоль/(м ² с) и 16 ч света/8 ч темноты в ростовой камере или содержали в теплице при естественном фотопериоде 21,2 ± 2,4°С. ASM (продаваемый как ACTIGARD®) был предоставлен компанией Syngenta в виде 50% (д.в.) вододиспергируемого гранулированного состава и растворен в воде. Чтобы оценить влияние ASM на защиту растений, четвертые листья японской редьки обрабатывали ASM (100 частей на миллион) методом погружения через 3 недели после посева или когда разворачивались пятые настоящие листья.Салицилгидроксамовая кислота (SHAM) и хлорид дифениленйодония (DPI) были получены от Sigma-Aldrich (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США). Растения обрабатывали ASM за 4 часа, 1 день и 1 неделю до инокуляции Pcal (дополнительная фигура 1). Растения обрабатывали погружением в воду или инокулировали водой в качестве контроля.

Бактериальные штаммы и условия роста

Патогенные Pseudomonas cannabina pv. alisalensis , штамм KB211 ( Pcal ; Sakata et al., 2019) был любезно предоставлен Экспериментальной станцией овощных и декоративных культур Нагано, Нагано, Япония. Pcal выращивали при 28°C в течение 24 ч на агаровой среде Kings B (KB; King et al. , 1954). Для инокулята бактерии суспендировали в стерильном дистиллированном H ₂ O и измеряли плотность клеток при 600 нм (OD ₆₀₀) с использованием измерителя плотности клеток Biowave CO8000 (biochrom, Кембридж, Великобритания).

Бактериальная инокуляция

Растения инокулировали распылением бактериальной суспензии в стерильной дистиллированной воде, содержащей 0.025% Silwet L-77 (биомедицинские науки, Токио, Япония). Для измерения площади поражения Pcal и симптомов заболевания растения японской редьки инокулировали бактериальной суспензией [5 × 10 ⁷ колониеобразующих единиц (КОЕ)/мл] до стока. Для анализа устьиц использовали метод погружения-инокуляции. Для анализа роста бактерий растения редьки японской инокулировали бактериальной суспензией (5 × 10 ⁷ КОЕ/мл). Затем растения инкубировали в ростовых камерах при относительной влажности приблизительно 100% в течение первых 24 часов, затем при относительной влажности приблизительно 70% до конца эксперимента. Площадь поражения и бактериальную популяцию оценивали через 1 неделю после инокуляции (wpi).

Для оценки процентной доли пораженной площади листа каждого листа путем визуальной оценки пораженной площади листа в процентах от общей площади листа. Площадь поражения оценивали в четырех независимых экспериментах.

Для оценки бактериального роста в японской редьке была измерена внутренняя бактериальная популяция после инокуляции погружением. Собирали инокулированные растения, и весь инокулированный лист использовали для количественного определения бактериальной популяции.Поверхность листьев стерилизовали 10% H ₂ O ₂ в течение 3 мин. После трехкратной промывки стерильной дистиллированной водой листья гомогенизировали в стерильной дистиллированной воде и разведенные образцы высевали на твердую агаризованную среду KB. Через два или три дня после посева образцов разведения бактериальные КОЕ подсчитывали и нормализовали как КОЕ на грамм, используя общую массу листа. Популяции бактерий оценивали в четырех независимых экспериментах.

Количественная ОТ-ПЦР в реальном времени

Для профилей экспрессии генов защиты японской редьки в ответ на ASM растения обрабатывали погружением в воду в качестве контроля или ASM на четвертых листьях.Через 4 часа общую РНК экстрагировали с помощью RNAiso Plus (Takara Bio, Shiga, Japan) в соответствии с протоколом производителя и использовали для количественной ОТ-ПЦР в реальном времени (qRT-PCR), как описано (Ishiga and Ichinose, 2016). Два микрограмма тотальной РНК обрабатывали gDNA Remover (TOYOBO, Осака, Япония) для удаления геномной ДНК, а обработанную ДНКазой РНК подвергали обратной транскрипции с использованием набора ReverTra Ace® qPCR RT Kit (TOYOBO). Затем кДНК (1:50) использовали для RT-qPCR с праймерами, показанными ниже, с THUNDERBIRD® qPCR Mix (TOYOBO) на системе реального времени с термоциклером Dice Real Time System (Takara Bio).Редис ген глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы ( GAPDH ) использовали в качестве внутреннего контроля. Средние значения CT, рассчитанные с использованием метода максимума второй производной из трех образцов, использовали для определения выражения кратности по сравнению с контролями (нулевое время). Праймеры, использованные в амплификации PR1 с помощью ПЦР, представляли собой 5′-AAAGCTACGCCGACCGACTACGAG-3′ и 5′-CCAGAAAAGTCGGCGCTACTCCA-3′; для PR2 , 5′-GTACGCTCTGTTCAAACCGACCC-3′ и 5′-TTTCCAACGATCCTCCGCCTGA-3′; для PR3 , 5′-TCTTTGGTCAGACTTCCCACGAG-3′ и 5′-GATGGCTCTTCCACACTGTCCGTA-3′; и для GAPDH , 5′-CGCTTCCTTCAACATCATTCCCA-3′ и 5′-TCAGATTCCTCCTTGATAGCCTT-3′ в соответствии с предыдущим исследованием (Alkooranee et al., 2015).

Устьичный анализ

Для оценки устьичной реакции использовали модифицированный метод, как описано ранее (Chitrakar and Melotto, 2010). Вкратце, растения японской редьки выращивали в течение 3 недель после посева, как описано ранее. Pcal выращивали при 28°C в течение 24 ч на агаризованной среде KB, затем суспендировали в стерильной дистиллированной воде до концентрации 1 × 10 ⁸ КОЕ/мл. Инокулированные погружением или инокулированные водой листья редиса визуализировали непосредственно через 4 часа после инокуляции (hpi) с использованием оптического микроскопа Nikon (Eclipse 80i).Кроме того, через 1 неделю после обработки ASM листья обрабатывали SHAM (1 мМ) и DPI (10 мкМ) с Pcal и без него. Ширина апертуры не менее 100 устьиц была измерена на уровне 4 л.с. и обработана (дополнительная фигура 1). Рассчитывали среднее значение и SE для ширины устьичного отверстия. Устьичные отверстия оценивали в трех независимых экспериментах.

Статистический анализ

Все данные представлены как среднее с SE. Все статистические анализы проводились с использованием EZR (Медицинский центр Сайтама, Медицинский университет Дзичи, Сайтама, Япония; Канда, 2013 г.), графического пользовательского интерфейса для R (версия 3.6,3; R Фонд статистических вычислений, Вена, Австрия). Двусторонний ANOVA и критерий достоверной значимой разницы Тьюки (HSD) использовались для анализа ширины устьичной апертуры. Различия p < 0,05 считали статистически значимыми.

Результаты

ASM подавляет развитие болезни

Pcal у японской редьки и вызывает SAR

Чтобы выяснить, эффективно ли ASM подавляет развитие болезни Pcal у растений редьки японской, растения инокулировали Pcal через 4 часа, 1 день и 1 неделю после обработки погружением ASM только на четвертый лист.Затем симптомы заболевания наблюдались через 7 дней после инокуляции (dpi; дополнительная фигура 1). Растения японской редьки, обработанные ASM, демонстрировали меньше симптомов заболевания, чем контрольные растения, обработанные водой, инокулированные Pcal , во все моменты времени после обработки ASM (дополнительная фигура 2). Мы также оценивали развитие болезни, измеряя площади поражения. Площадь поражения Pcal на обработанных ASM растениях японской редьки была значительно меньше, чем у контрольных растений, обработанных водой, даже если период предварительной обработки ASM составлял всего 4 часа (рис. 1A-C).Кроме того, площадь поражения была уменьшена не только на листьях, обработанных АСМ, но и на необработанных верхних и нижних листьях (рис. 1А-С). Чтобы выяснить, подавляет ли ASM рост бактерий, а также площадь поражения, мы также измерили популяцию бактерий. У японской редьки четвертые листья, предварительно обработанные ASM в течение 4 часов, популяций Pcal были примерно в 10 раз меньше по сравнению с таковыми у обработанного водой контроля (рис. 2А). Кроме того, через 1 день после обработки (dpt) и через 1 неделю после обработки (wpt) с помощью ASM популяции Pcal были примерно в 100 раз меньше по сравнению с контрольными группами, обработанными водой (рис. 2B, C).Более того, в необработанных третьем и пятом листьях популяции Pcal также были меньше по сравнению с контрольными растениями, обработанными водой (рис. 2А-С). Эти результаты показывают, что ASM способен подавлять развитие симптомов и размножение бактерий в редьке японской после инокуляции Pcal , и этот эффект приобретается системно.

Рисунок 1 . Площадь поражения (%) обработанных ацибензолар-S-метил (ASM) и необработанных листьев японской редьки после Pseudomonas cannabina pv. alisalensis ( Pcal ) прививка. Выращенные в теплице растения японской редьки инокулировали распылением Pcal (5 × 10 ⁷ КОЕ/мл) через 4 часа (A) , через 1 день (B) и через 1 неделю (C) после Обработка погружением ASM (100 частей на миллион) на четвертых листьях. Симптомы заболевания четвертых листьев, обработанных ASM, и необработанных верхних (пятых) и нижних (третьих) листьев контролировали путем измерения площадей поражения через 1 неделю после инокуляции (wpi). Вертикальные полосы указывают SE для четырех независимых повторений.Звездочки указывают на значительное отличие от контроля обработки воды в t -тесте (^* p < 0,05; ^** p < 0,01).

Рисунок 2 . Бактериальные популяции обработанных и необработанных ASM системных листьев японской редьки после инокуляции Pcal . Трехнедельные растения японской редьки инокулировали распылением суспензий Pcal (5 × 10 ⁷ КОЕ/мл), 4 часа (A) , 1 день (B) и 1 неделю (C ) после обработки погружением ASM (100 частей на миллион) на четвертых листьях.Бактериальные популяции в обработанных ASM четвертых листьях и необработанных системных верхних (пятых) и нижних (третьих) листьях определяли путем посева на селективную среду, как описано в разделе «Методы» на 1-wpi. Вертикальные полосы указывают SE для трех независимых экспериментов. Звездочки указывают на значительное отличие от контроля обработки воды в тесте t (^* p <0,05).

ASM активирует защиту на основе устьиц от

Pcal

Чтобы выяснить, активирует ли ASM защиту на основе устьиц японской редьки, мы наблюдали реакцию устьиц после инокуляции Pcal четвертых листьев, обработанных ASM, и их необработанных третьих и пятых листьев. Через 4 часа после обработки ASM все тестируемые листья (четвертые листья, обработанные ASM, а также необработанные верхние и нижние листья) продемонстрировали закрытие устьиц после инокуляции Pcal , в отличие от контрольных растений, не обработанных ASM (рис. 3A–C). . Между тем, через 1 дпт и 1 дпт после обработки ASM все тестируемые листья, за исключением третьих листьев при 1 дпт, демонстрировали закрытие устьиц независимо от инокуляции Pcal (рис. 3D-I). Эти результаты показывают, что обработка ASM подавляла открытие устьиц, по крайней мере, на 1 dpt, и этот эффект сохранялся в течение недели.Кроме того, эффект распространялся на необработанные системные листья (рис. 3A, C, D, F, G, I). Через 1 dpt и 1 wpt после обработки ASM все тестируемые листья демонстрировали аналогичный или повышенный уровень закрытия устьиц после инокуляции Pcal по сравнению с контрольными растениями без инокуляции. Эти результаты показывают, что ASM активирует устьичную защиту против Pcal на японской редьке локально и системно.

Рисунок 3 . Ширина устьичных отверстий (мкм) обработанных и необработанных ASM системных листьев растений редьки японской после инокуляции Pcal .Четвертые листья японской редьки погружали в ASM (100 ppm) и инокулировали погружением в суспензии Pcal (1 × 10 ⁸ КОЕ/мл) 4 ч (A–C) , 1 день ( D-F) и 1 неделя (G-I) после лечения ASM. Были получены микроскопические изображения обработанных ASM четвертых листьев (B,E,H) и необработанных системных третьих листьев (A,D,G) и пятых листьев (C,F,I) 4 ч после инокуляции (hpi) Pcal с использованием оптического микроскопа Nikon (Eclipse 80i).Затем была проанализирована ширина устьичных отверстий (мкм) по изображению J с использованием не менее 100 устьиц. На всех гистограммах вертикальные полосы указывают SE для трех биологических повторностей. Значимые факторы (SF) показывают, были ли два независимых фактора, обработка ASM (A) и инокуляция Pcal (P), и/или их взаимодействие, I (A × P), статистически значимыми (двухсторонний ANOVA, р < 0,05). Когда взаимодействие было значимым, выполнялся тест Тьюки на честно значимую разницу (HSD).Разные буквы указывают на значительные различия между лечением/прививкой (90–389 p 90–390 < 0,05). p значения двухфакторного дисперсионного анализа показаны в дополнительной таблице 1.

Применение SHAM уменьшает вызванное ASM закрытие устьиц в местных и системных листьях японской редьки

Активные формы кислорода (АФК) являются важными вторичными мессенджерами устьичного иммунитета (Joshi-Saha et al., 2011). Закрытие устьиц фитогормоном SA требует продукции АФК пероксидазами клеточной стенки (Mori et al., 2001; Хокон и др., 2011). Поскольку ASM является синтетическим аналогом SA, мы исследовали, опосредована ли передача сигналов ASM-индуцированного закрытия устьиц АФК с использованием ингибитора пероксидазы, SHAM, и ингибитора NADPH-оксидазы, дифенилен-йодония (DPI). Через 1 неделю после обработки погружением ASM на четвертые листья обработанные ASM листья и необработанные третий и пятый листья обрабатывали погружением с помощью SHAM (1 мМ) или DPI (10 мкМ). Затем через 4 ч после химической обработки исследовали устьичные отверстия каждого листа.Индуцированное ASM закрытие устьиц подавлялось SHAM (Рисунки 4A-C), что указывает на то, что пероксидазы клеточной стенки могут участвовать в опосредовании продукции ROS во время ASM-индуцированного закрытия устьиц. И наоборот, экзогенное применение DPI не ингибировало закрытие устьиц, вызванное ASM (рис. 4A-C). Мы получили аналогичные результаты для листьев, обработанных ASM, и их необработанных системных листьев, одновременно инокулированных Pcal при обработке SHAM или DPI (дополнительные рисунки 3A-C). Эти результаты свидетельствуют о том, что АФК, продуцируемые пероксидазами клеточной стенки, вероятно, по крайней мере частично опосредуют передачу сигналов при закрытии устьиц, индуцированном ASM.

Рисунок 4 . Ширина устьичной апертуры (мкм) у растений японской редьки, обработанных ASM, после применения SHAM или DPI. Четвертые листья японской редьки обрабатывали погружением с ASM (100 ppm), а через 1 неделю SHAM (1 мМ) и DPI (10 мкМ) обрабатывали погружением на четвертые листья, обработанные ASM, и необработанные системные верхние ( пятый) и нижний (третий) лист. Изображения под микроскопом третьего (A) , четвертого (B) и пятого (C) листьев были получены через 4 часа после обработки химическими веществами с использованием оптического микроскопа Nikon (Eclipse 80i).Затем была проанализирована ширина устьичных отверстий (мкм) по изображению J с использованием не менее 100 устьиц. На всех гистограммах вертикальные полосы указывают SE для трех биологических повторностей. Значимые различия (90 389 p 90 390 < 0,05) обозначены разными буквами на основании теста Тьюки HSD.

ASM индуцирует экспрессию генов, связанных с защитой, в японской редьке

ASM также индуцировал экспрессию связанных с защитой генов, включая белки PR у Arabidopsis thaliana , Brachypodium distachyon , табака, огурца и капусты (Wendehenne et al., 1998; Накашита и др., 2002; Ясуда и др., 2008 г.; Козай и др., 2018a,b; Ишига и др., 2020). Чтобы исследовать влияние обработки ASM на экспрессию генов защиты японской редьки, мы исследовали профили экспрессии PR1 , PR2 и PR3 в ответ на ASM. Экспрессия PR1 , PR2 и PR3 значительно индуцировалась в четвертых листьях через 4 часа после обработки ASM (рис. 5A-C). Кроме того, как в необработанных верхних, так и в нижних листьях экспрессия всех генов была индуцирована или имела тенденцию к индуцированию (рис. 5А-С).Эти результаты показывают, что ASM индуцирует экспрессию генов, связанных с защитой, как в локальных, так и в системных листьях японской редьки.

Рисунок 5 . Профили экспрессии генов PR1 , PR2 и PR3 растения японской редьки в обработанных ASM и необработанных системных листьях. Четвертые листья 3-недельных растений редьки японской обрабатывали ASM (100 частей на миллион) или водой в качестве контроля. Через 4 ч экспрессия PR1 (A) , PR2 (B) и PR3 (C) в обработанных ASM четвертых листьях, а также необработанных системных верхних (пятых) и нижних (третий) листья определяли с помощью количественной ПЦР с обратной транскрипцией в реальном времени (RT-qPCR) с наборами ген-специфических праймеров. Экспрессию нормализовали с помощью глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы ( GAPDH ). Вертикальные полосы указывают SE для трех биологических повторностей. Звездочки указывают на достоверное отличие от водного контроля в t -тесте (^* p < 0,05; ^** p < 0,01).

Обсуждение

Существует повышенный спрос на разработку устойчивых стратегий борьбы с болезнями. ASM прогнозируется как дополнительный инструмент борьбы с болезнями для защиты многочисленных сельскохозяйственных культур от патогенов без появления химически устойчивых штаммов.Наши результаты ясно показали, что обработка погружением ASM эффективно подавляла образование повреждений Pcal и размножение бактерий на растениях японской редьки (рис. 1, 2; дополнительная рис. 2). Ранее мы также продемонстрировали, что замачивание почвы ASM подавляло развитие болезни Pcal , связанное с уменьшением популяции бактерий в капусте (Ishiga et al., 2020). Эти результаты показывают, что ASM является мощным средством против Pcal , возбудителя бактериального ожога крестоцветных растений.

Наиболее важным открытием было то, что МАС значительно усиливала системную активацию защитного ответа. Снижение развития болезней и роста бактерий наблюдалось не только на обработанных четвертых листьях, но и на необработанных третьих и пятых листьях (рис. 1, 2; дополнительная рис. 2). Кроме того, ASM запускал защиту на основе устьиц и индукцию экспрессии генов, связанных с SAR, как на обработанных, так и на необработанных листьях (рис. 3, 5). Cools and Ishii (2002) продемонстрировали, что предварительная обработка ASM первых листьев огурца защищала целые растения от заражения вирулентным грибковым патогеном Colletotrichum orbiculare .Через три часа после обработки ASM на первых листьях быстро происходило индуцированное ASM системное праймирование экспрессии PAL1 в растениях огурца с усиленной экспрессией на третьих листьях (Cools and Ishii, 2002). Интересно, что наши результаты показали, что ASM-индуцированная системная защита была приобретена не только на необработанных верхних листьях, но и на необработанных нижних листьях (рис. 5). Kubota и Abiko (2000) продемонстрировали, что через 7 дней после первой инокуляции Colletotrichum lagenarium и Pythium ultimum на семядолях и первичных листьях огурца наблюдалась индуцированная устойчивость к контрольной инокуляции этими патогенными грибами в гипокотиле.Эти результаты означают, что внекорневая обработка листьев может предотвратить заболевание нижних частей растения, в том числе гипокотилей и корней (Kubota and Abiko, 2000). Важно отметить, что Pcal вызывает обесцвечивание гипокотиля и корня японской редьки (Takikawa and Takahashi, 2014). Ожидается, что системная защита, вызванная ASM, может стать мощным инструментом борьбы с бактериальным ожогом японской редьки.

Профили экспрессии генов PR1 , PR2 и PR3 индуцировались по крайней мере через 4 часа после обработки ASM как в обработанных, так и в необработанных листьях (рис. 5).ASM индуцировал экспрессию PR1 , PR2 и PR5 в A. thaliana и капусте (Uknes et al., 1992; Lawton et al., 1996; Ishiga et al., 2020). ASM также индуцировал экспрессию PR1 , PR3 и PR5 в табаке (Mandal et al., 2008). У Raphanus alboglabra , PR1 , PR2 и PR3 экспрессия была усилена грибковым патогеном, Erysiphe Crusiferarum (Alkooranee et al., 2015). Эти результаты позволяют предположить, что PR1 , PR2 и PR3 могут служить маркерными генами SAR у японской редьки.

В наших результатах эффект контроля над заболеванием, вызванный ASM, был очевиден при 4 часах в сутки (рис. 1, 2), а экспрессия генов, связанных с SAR, также индуцировалась при 4 часах в день (рис. 5). Бензо(1,2,3)тиадиазол-7-карбоновая кислота (ацибензолар), но не сама АСМ, была обнаружена в необработанных третьих листьях 3 dpt на первых листьях огурца (Ishii et al., 2002). SABP2 катализирует превращение ASM в ацибензолар, вызывая SAR (Tripathi et al. , 2010). Таким образом, ацибензолар может действовать аналогично СА, активируя NPR1 и SAR. Учитывая, что ацибензолар не был обнаружен в необработанных листьях огурца на 1 dpt (Ishii et al., 2002), заманчиво предположить, что предполагаемые сигнальные молекулы быстро перемещаются из листьев, обработанных ASM, в необработанные листья японской редьки. Было идентифицировано несколько кандидатов для этого дальнего сигнала, включая метилсалицилат (MeSA), G3P-зависимый сигнал, производный от SFD1/GLY1, белок-переносчик липидов DIR1, азелаиновую кислоту дикарбоновой кислоты (AzA), абиетандитерпеноид дегидроабиртинал. (DA), жасмоновая кислота (JA) и N -гидроксипипеколиновая кислота ( N -гидрокси-Pip; Dempsey and Klessig, 2012; Chen et al., 2018; Хартманн и др., 2018). Среди них N -гидрокси-Pip действует как первичный регулятор SAR (Návarová et al., 2012; Zeier, 2013; Chen et al., 2018; Hartmann et al., 2018). У A. thaliana эти ответы включают накопление камалексина (фитотоксина) и экспрессию связанных с защитой генов, включая ALD1 , FMO1 и PR1 (Bernsdorff et al. , 2016). Потребуется дальнейший анализ для выяснения мобильных сигналов, вызывающих SAR у японской редьки.

ASM индуцировал устьичную защиту от Pcal в течение 4 часов как у капусты, так и у японской редьки (рис. 3; Ishiga et al., 2020). Мы также показали, что закрытие устьиц, вызванное ASM, подавлялось ингибитором пероксидазы, SHAM, но не ингибитором NADPH-оксидазы, DPI (рис. 4; дополнительная рис. 3). Хокон и др. (2011) сообщили, что SA-индуцированное закрытие устьиц сопровождалось продукцией ROS, опосредованной пероксидазой, у A. thaliana . Следовательно, эти результаты предполагают, что закрытие устьиц, вызванное ASM, тесно связано с продукцией ROS через пероксидазу.Наши результаты также показали, что ASM-индуцированная защита на основе устьиц наблюдалась не только на обработанных листьях, но и на необработанных листьях (рис. 3). Lin и Ishii (2009) продемонстрировали, что быстрое накопление H ₂ O ₂ происходило в жидкостях ксилемы стебля огурца во время SAR, вызванного ASM. Takahashi and Shinozaki (2019) сообщили, что накопление АБК, опосредованное световым стрессом, индуцирует волну ROS/Ca ²⁺, распространяющуюся от локальных листьев к системным листьям с высокой скоростью передачи, предполагая, что локальная волна ROS/Ca ²⁺ функционирует как Дальний сигнал для активации закрытия устьиц в условиях легкого стресса.Следовательно, возможно, что АФК, индуцированные обработкой АСМ, активируют закрытие устьиц в системном ответе во время инфицирования патогеном.

Основываясь на наших результатах, мы предлагаем модель закрытия устьиц, вызванную обработкой ASM. ASM индуцирует продукцию ROS, опосредованную SHAM-чувствительной пероксидазой, что приводит к закрытию устьиц. Затем локальные АФК функционируют как сигнал на большом расстоянии, чтобы вызвать закрытие устьиц в системном ответе после лечения АСМ. В дополнение к АФК ожидается, что некоторые мобильные сигналы, возможно, быстро транспортируются, чтобы вызвать продукцию АФК, что приводит к закрытию устьиц. Для понимания механизма SAR, вызванного ASM, потребуется дальнейший анализ.

Мы ясно продемонстрировали, что обработка погружением ASM защищает растения японской редьки от Pcal , возбудителя бактериального ожога, путем активации SAR, такой как защита на основе устьиц. Кроме того, мы наблюдали, что ASM-индуцированный защитный ответ приобретался не только на обработанных листьях, но и на необработанных верхних и нижних листьях. Эти результаты подчеркивают роль ASM как эффективной стратегии устойчивой борьбы с болезнями.

Заявление о доступности данных

Наборы данных, представленные в этом исследовании, можно найти в онлайн-репозиториях. Названия репозитория/репозиториев и регистрационные номера можно найти по адресу: https://figshare.com/s/439806eb8e944c0f4dbb.

Вклад авторов

NS, ST и YI разработали исследование и написали рукопись. NS, TI, ST и YI проводили эксперименты, собирали и анализировали данные. Все авторы внесли свой вклад в статью и одобрили представленную версию.

Финансирование

Эта работа была частично поддержана Исследовательским проектом по устойчивой продовольственной безопасности в виде операционного гранта от Национальной университетской корпорации и Японского агентства по науке и технологиям (JST) Исследовательские исследования для передовых технологий (ERATO) NOMURA Проект контроля микробных сообществ, Номер гранта: JPMJER1502.

Конфликт интересов

YI получила средства на исследования от Syngenta Japan.

Остальные авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Мы благодарим доктора Кристину Бейкер за редактирование рукописи. Pcal KB211 был любезно предоставлен Экспериментальной станцией овощных и декоративных культур Нагано, Нагано, Япония.

Дополнительный материал

Дополнительный материал к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www. frontiersin.org/articles/10.3389/fpls.2020.565745/full#supplementary-material

Ссылки

Alkooranee, JT, Yin, Y., Aledan, T.R., Jiang, Y., Lu, G., Wu, J., et al. (2015). Системная устойчивость к мучнистой росе у Brassica napus (AACC) и Raphanus alboglabra (RRCC) за счет Trichoderma harzianum Th22. PLoS One 10:e0142177. doi: 10.1371/journal.pone.0142177

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Бернсдорф Ф., Деринг А. К., Грюнер К., Шук С., Бройтигам А. и Зейер Дж. (2016). Пипеколиновая кислота управляет системной приобретенной устойчивостью растений и защитным праймингом посредством зависимых от салициловой кислоты и независимых путей. Растительная клетка 28, 102–129. doi: 10.1105/tpc.15.00496

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Chen, Y.C., Holmes, E.C., Rajniak, J., Kim, J.G., Tang, S., Fischer, C.R., et al. (2018). N-гидроксипипеколиновая кислота является мобильным метаболитом, который индуцирует устойчивость к системным заболеваниям у арабидопсиса . Проц. Натл. акад. науч. США 115, E4920–E4929. doi: 10.1073/pnas.18052

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Охлаждает, Х.Дж. и Исии Х. (2002). Предварительная обработка растений огурца ацибензолар-S-метилом системно активирует ген фенилаланин-аммиачной лиазы ( PAL1 ) для усиления экспрессии при поражении патогенным грибком. Физиол. Мол. Завод Патол. 61, 273–280. doi: 10.1006/pmpp.2003.0439

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Доке, Н. (1983). Генерация супероксид-аниона протопластами клубней картофеля при гиперчувствительной реакции на компоненты стенки гиф Phytophthora infestans и специфическое ингибирование реакции супрессорами гиперчувствительности. Физиол. Завод Патол. 23, 359–367. дои: 10.1016/0048-4059(83)

-6

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Hartmann, M., Zeier, T., Bernsdorff, F., Reichel-Deland, V. , Kim, D., Hohmann, M., et al. (2018). N-гидроксипипеколевая кислота, генерируемая флавинмонооксигеназой, является критическим элементом системного иммунитета растений. Сотовый 173, 456.e16–469.e16. doi: 10.1016/j.cell.2018.02.049

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Исига Ю.и Ичиносе Ю. (2016). Pseudomonas syringae pv. томат OxyR необходим для вирулентности томатов и Arabidopsis . Мол. Взаимодействие растительных микробов. 29, 119–131. doi: 10.1094/MPMI-09-15-0204-R

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ишига Т., Иида Ю., Саката Н., Угаджин Т., Хирата Т., Танигути С. и др. (2020). Ацибензолар-S-метил активирует устьичную защиту от Pseudomonas cannabina pv. alisalensis в капусте. Дж. Генерал Плант Патол. 86, 48–54. doi: 10.1007/s10327-019-00883-5

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Исии Х. , Като Т., Яманака М., Кулс Х. и Сугияма Т. (2002). Активность индукции устойчивости к системным заболеваниям и метаболизм ацибензолар-S-метила в огурце (аннотация на японском языке). Абстр. 27-я анна. Встретить. наук о пестицидах. соц. Япония.

Академия Google

Юнг Х.В., Чаплински Т.Дж., Ван Л., Глейзбрук Дж. и Гринберг Дж. Т. (2009). Примирование системного иммунитета растений. Наука 324, 89–91. doi: 10.1126/science.1170025

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Хокон, А. Р., Окума, Э., Хоссейн, М. А., Мунемаса, С., Ураджи, М., Накамура, Ю., и соавт. (2011). Участие внеклеточного окислительного взрыва в закрытии устьиц, вызванном салициловой кислотой, у Arabidopsis . Окружающая среда растительных клеток. 34, 434–443.doi: 10.1111/j.1365-3040.2010.02253.x

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ким, Т. Х., Бемер, М., Ху, Х., Нисимура, Н., и Шредер, Дж. И. (2010). Сеть передачи сигналов защитных клеток: достижения в понимании передачи сигналов абсцизовой кислоты, CO ₂ и Ca ²⁺. год. Преподобный завод биол. 61, 561–591. doi: 10.1146/annurev-arplant-042809-112226

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Кинг, Э.О., Уорд, М.К., и Реней, Д.Е. (1954). Две простые среды для демонстрации пиоцианина и флуоресцина. Дж. Лаб. клин. Мед. 44, 301–307.

Реферат PubMed | Академия Google

Кодзай Ю., Кимура М., Ватанабэ М., Кусуноки К., Осака Д., Судзуки Т. и др. (2018а). Иммунитет, зависящий от салициловой кислоты, способствует устойчивости риса к Rhizoctonia solani , некротрофному грибковому возбудителю гнили, и Brachypodium distachyon . Новый фитол. 217, 771–783. doi: 10.1111/nph.14849

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Кодзай Ю., Ноутоши Ю., Иноуэ К., Симидзу М. , Онда Ю. и Мочида К. (2018b). Бензотиадиазол, индуктор защиты растений, отрицательно регулирует устойчивость к гнили у Brachypodium distachyon . наук. Респ. 8:17358. doi: 10.1038/s41598-018-35790-w

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Кубота, М.и Абико, К. (2000). Индуцированная устойчивость гипокотиля огурца путем заражения листьев Colletotrichum lagenarium . Дж. Генерал Плант Патол. 66, 128–131. дои: 10.1007/PL00012933

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Кунц В., Шуртер Р. и Мэцке Т. (1997). Химия бензотиадиазольных активаторов растений. Пештич. науч. 50, 275–282. doi: 10.1002/(SICI)1096-9063(199708)50:4<275::AID-PS593>3.0.CO;2-7

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Лоутон, К.А., Фридрих Л., Хант М., Вейманн К., Делани Т., Кессманн Х. и соавт. (1996). Бензотиадиазол индуцирует устойчивость к болезням у Arabidopsis за счет активации системного пути передачи сигнала приобретенной устойчивости. Завод Ж. 10, 71–82. doi: 10.1046/j.1365-313X.1996.10010071.x

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Лин Т. и Исии Х. (2009 г.). Накопление H ₂ O ₂ в ксилемной жидкости стеблей огурца во время ASM-индуцированной системной приобретенной устойчивости (SAR) связано с повышенной активностью LOX и временным накоплением шикимовой кислоты. евро. Дж. Плант Патол. 125, 119–130. doi: 10.1007/s10658-009-9464-9

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Мандал, Б., Мандал, С., Чинос, А.С., Мартинес, Н., Калбрет, А.К., и Паппу, Х.Р. (2008). Биологический и молекулярный анализ ацибензолар-S-метил-индуцированной системной приобретенной устойчивости табака дымовой сушки к вирусу пятнистого увядания томатов. Фитопатология 98, 196–204. doi: 10.1094/PHYTO-98-2-0196

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Мори, И.К., Пинонтоан Р. , Кавано Т. и Муто С. (2001). Участие образования супероксида в закрытии устьиц, вызванном салициловой кислотой, у Vicia faba . Физиол клеток растений. 42, 1383–1388. doi: 10.1093/pcp/pce176

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Накашита Х., Йошиока К., Ясуда М., Нитта Т., Араи Ю., Йошида С. и др. (2002). Пробеназол индуцирует системную приобретенную устойчивость табака за счет накопления салициловой кислоты. Физиол. Мол. Завод Патол. 61, 197–203. doi: 10.1006/pmpp.2002.0426

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Нарусака Ю., Нарусака М., Хорио Т. и Исии Х. (1999). Индукция устойчивости к болезням у огурцов с помощью ацибензолар-S-метила и экспрессия генов, связанных с устойчивостью. Япония. Дж. Фитопат. 65, 119–122. doi: 10.3186/jjphytopath.65.116

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Нарусака Ю., Нарусака М. и Исии Х.(2001). Поиск с помощью дифференциального дисплея новых генов, участвующих в индуцированной устойчивости к болезням огурца, обработанного ацибензолар-S-метилом. Дж. Генерал Плант Патол. 67, 207–211. дои: 10.1007/PL00013013

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Наварова, Х., Бернсдорф, Ф., Деринг, А.С., и Зейер, Дж. (2012). Пипеколиновая кислота, эндогенный медиатор усиления и прайминга защиты, является важным регулятором индуцируемого иммунитета растений. Растительная клетка 24, 5123–5141.doi: 10.1105/tpc.112.103564

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Остендорп М., Кунц В., Дитрих Б. и Штауб Т. (2001). Индуцированная химией устойчивость растений к болезням. евро. Дж. Плант Патол. 107, 19–28. дои: 10.1023/A:1008760518772

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Пак П., Курихара Т., Нита М., Икеда К., Иноуэ К. и Исии Х. (2019). Применение электронной микроскопии с фильтрацией энергии (EFEM) для анализа перекиси водорода и лигнина в эпидермальных стенках листьев огурца, вызванных обработкой ацибензолар-S-метилом, перед инокуляцией Colletotrichum orbiculare . Завод Патол. 68, 1624–1634. doi: 10.1111/ppa.13095

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Продхан М.Ю., Иссак М., Накамура Т., Мунемаса С., Накамура Ю. и Мурата Ю. (2017). Для передачи сигналов хитозана в замыкающих клетках требуется эндогенная салициловая кислота. Бионауч. Биотехнолог. Биохим. 81, 1536–1541. дои: 10.1080/051.2017.1332979

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Саката, Н., Исига, Т., Сайто, Х., Нгуен, В. Т., и Ишига, Ю. (2019). Мутагенез транспозонов выявляет Pseudomonas cannabina pv. alisalensis оптимизирует свои факторы вирулентности для патогенности на разных хозяевах. PeerJ 7:e7698. doi: 10.7717/peerj.7698

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Такахаши Ф., Очиаи М., Икеда К. и Такикава Ю. (2013). Устойчивость к стрептомицину и меди у Pseudomonas cannabina pv. alisalensis (аннотация на японском языке). Япония. Дж. Фитопат. 35.

Академия Google

Такикава Ю. и Такахаши Ф. (2014). Бактериальная пятнистость листьев и фитофтороз крестоцветных (Brassicaceae), вызванные Pseudomonas syringae pv. maculicola и P. cannabina pv. алисаленсис . Дж. Генерал Плант Патол. 80, 466–474. doi: 10.1007/s10327-014-0540-4

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Тор, К., Цзян, С., Мишард, Э., Джордж Дж., Шерцер С., Хуанг С. и др. (2020). Проницаемый для кальция канал OSCA1.3 регулирует устьичный иммунитет растений. Природа 585, 569–573. doi: 10.1038/s41586-020-2702-1

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Трипати Д., Цзян Ю. Л. и Кумар Д. (2010). SABP2, метилсалицилатэстераза, необходима для системной приобретенной устойчивости, индуцированной ацибензолар-S-метилом у растений. ФЭБС Письмо. 584, 3458–3463. дои: 10.1016/j.febslet.2010.06. 046

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Укнес С., Мауч-Мани Б., Мойер М., Поттер С., Уильямс С., Динчер С. и др. (1992). Приобретенная устойчивость у Arabidopsis . Растительная клетка 4, 645–656. doi: 10.1105/tpc.4.6.645

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Wang, Y., Schuck, S., Wu, J., Yang, P., Döring, A.C., Zeier, J., et al. (2018). Регуляторная петля MPK3/6-WRKY33-ALD1-пипеколиновая кислота способствует развитию системной приобретенной резистентности. Растительная клетка 30, 2480–2494. doi: 10.1105/tpc.18.00547

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Wendehenne, D., Durner, J., Chen, Z., and Klessig, D.F. (1998). Бензотиадиазол, индуктор защитных сил растений, ингибирует каталазу и аскорбатпероксидазу. Фитохимия 47, 651–657. doi: 10.1016/S0031-9422(97)00604-3

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Ву, Ф. , Чи, Ю., Цзян, З., Сюй, Ю., Се, Л., Хуанг, Ф., и другие. (2020). Сенсор перекиси водорода HPCA1 представляет собой киназу рецептора LRR в Arabidopsis . Природа 578, 577–581. doi: 10.1038/s41586-020-2032-3

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ясуда М., Исикава А., Дзикумару Ю., Секи М., Умэдзава Т., Асами Т. и другие. (2008). Антагонистическое взаимодействие между системной приобретенной устойчивостью и опосредованной абсцизовой кислотой реакцией на абиотический стресс у Arabidopsis . Растительная клетка 20, 1678–1692.doi: 10.1105/tpc.107.054296

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Чжао, Л., Фуонг, Л.Т., Луан, М.Т., Фитрианти, А.Н., Мацуи, Х., Накагами, Х., и др. (2019). Пероксидаза класса III PRX34 является компонентом устойчивости к болезням Arabidopsis . Дж. Генерал Плант Патол. 85, 405–412. doi: 10.1007/s10327-019-00863-9

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Ацибензолар-S-метил системно активирует устьичную защиту японской редьки

Front Plant Sci. 2020; 11: 565745.

Нанами Саката

¹ Факультет наук о жизни и окружающей среде, Университет Цукуба, Цукуба, Япония

Такако Исига

¹ Университет Цукубы, Факультет наук о жизни и окружающей среде

Shizuku Taniguchi

² Syngenta Япония, ушику, Япония

Yasuhiro Ishiga

¹ Факультет жизни и окружающей среды, Университета Цукубы, Цукуба, Япония

¹ Факультет жизни и экологических наук, Университет Цукуба, Цукуба, Япония

² Syngenta Japan, Ушику, Япония

Под редакцией: Дирка Альберта Балмера, Syngenta, Швейцария

Рецензирование: Хериксен Пуэрари, Федеральный университет Гояса, Бразилия; Yoshiteru Noutoshi, Университет Окаяма, Япония

Эта статья была отправлена в раздел «Взаимодействия с патогенами растений» журнала Frontiers in Plant Science

Поступила в редакцию 26 мая 2020 г.; Принято 7 октября 2020 г.

Это статья с открытым доступом, распространяемая на условиях лицензии Creative Commons Attribution License (CC BY). Использование, распространение или воспроизведение на других форумах разрешено при условии указания оригинального автора(ов) и владельца(ей) авторских прав и при условии цитирования оригинальной публикации в этом журнале в соответствии с общепринятой академической практикой. Запрещается использование, распространение или воспроизведение без соблюдения этих условий.

Abstract

Ацибензолар-S-метил (АСМ) – известный активатор растений, представляющий собой синтетический аналог салициловой кислоты (СК). В последнее время медьсодержащие фунгициды и антибиотики являются основными стратегиями борьбы с бактериальными заболеваниями. Однако уже обнаружены устойчивые штаммы. Таким образом, существует растущий спрос на устойчивые новые стратегии борьбы с болезнями. Мы исследовали эффект борьбы с болезнью ASM в отношении Pseudomonas cannabina pv. alisalensis ( Pcal ), вызывающий бактериальный ожог японской редьки.В этом исследовании мы продемонстрировали, что ASM эффективно подавляет развитие симптомов заболевания Pcal , связанное с уменьшением популяций бактерий на листьях японской редьки. Интересно, что мы также продемонстрировали, что ASM активирует системную приобретенную устойчивость (SAR), включая защиту на основе устьиц на верхних и нижних листьях, не обработанных ASM. Активные формы кислорода (АФК) являются важными вторичными мессенджерами в защите на основе устьиц. Мы обнаружили, что ASM индуцирует закрытие устьиц, индуцируя продукцию АФК через пероксидазу.Эти результаты показывают, что закрытие устьиц, вызванное обработкой ASM, эффективно предотвращает инвазию патогена Pcal в растения и, в свою очередь, снижает развитие болезни.

Ключевые слова: Ацибензолар-S-метил, Pseudomonas cannabina pv. alisalensis , редька японская, защита на основе устьиц, системная приобретенная устойчивость, активатор защиты растений, пероксидаза, активные формы кислорода

Введение

Недавно несколько бактериальных патогенов были идентифицированы как возбудители тяжелых мировых эпидемий. Pseudomonas cannabina pv. alisalensis ( Pcal ) вызывает бактериальный ожог крестоцветных растений (Brassicaceae; Takikawa and Takahashi, 2014) и наносит большой ущерб выращиванию крестоцветных, включая капусту, пекинскую капусту и японскую редьку. На редьке японской симптомы болезни, вызванные вновь выделенным штаммом Pcal , наблюдались на листьях и корнях (Takikawa and Takahashi, 2014). Обесцвечивание корней и некротические поражения листьев имеют серьезные последствия для коммерческой ценности японской редьки.Химические обработки, такие как медные фунгициды и антибиотики, являются популярными стратегиями борьбы с бактериальными заболеваниями. Однако было обнаружено штаммов Pcal , устойчивых к этим химическим веществам (Takahashi et al., 2013). Таким образом, спрос на разработку устойчивых альтернативных стратегий растет.

Ацибензолар-S-метил (АСМ), синтетический аналог салициловой кислоты (СК), использовался для защиты сельскохозяйственных культур от ряда болезней путем активации защиты растений (Kunz et al. , 1997; Oostendorp et al., 2001). Мы продемонстрировали, что замачивание почвы с ASM вызывало системную приобретенную устойчивость (SAR) против Pcal у капусты (Ishiga et al., 2020). Процессы SAR можно разделить на три этапа: локальная иммунная активация, передача информации от локальных к системным тканям с помощью мобильных сигналов и активация и прайминг защиты в системных тканях (Jung et al., 2009; Shah and Zeier, 2013; Wang et al. , 2018). Таким образом, наши предыдущие результаты подразумевают, что мобильные сигналы, генерируемые ASM-триггером SAR в необработанных листьях.Предварительная обработка первых листьев растения огурца ASM защищала целые растения от грибковой инфекции Colletotrichum orbiculare (Cools and Ishii, 2002). У растений огурца генов SAR быстро и сильно экспрессировались в верхних листьях после обработки первого листа ASM (Narusaka et al., 1999, 2001; Cools and Ishii, 2002). Однако механизм SAR, вызванный ASM, до сих пор не ясен. Мы также продемонстрировали, что ASM защищает растения капусты от Pcal , активируя защиту на основе устьиц (Ishiga et al. , 2020). Кроме того, ASM индуцирует экспрессию маркерных генов SAR, включая PR1 , PR2 и PR5 , в растениях капусты (Ishiga et al., 2020). Кроме того, поскольку многие лиственные бактериальные патогены нацелены на устьица как на место проникновения, ожидается, что ASM будет иметь мощный эффект борьбы с болезнями. Однако эффективность ASM в подавлении развития болезни против Pcal на других культурах (помимо капусты) не оценивалась.

Продукция АФК на клеточной поверхности, которая называется окислительным взрывом, является одной из самых ранних защитных реакций, обнаруживаемых во время иммунитета, запускаемого патоген-ассоциированным молекулярным паттерном (PAMP) (PTI), и иммунитета, запускаемого эффектором (ETI).Doke (1983) впервые продемонстрировал, что члены АФК, возможно, функционируют как химические сигналы, необходимые для индукции реакции гиперчувствительности (HR). Окислительный взрыв, вызванный сигналами патогенов, необходим для защитных механизмов всего растения (Fobert and Després, 2005). Апопластные АФК образуются из NADPH-оксидаз, локализованных в плазматической мембране, и пероксидаз, локализованных в клеточной стенке (Zhao et al., 2019). АФК известны как антимикробные молекулы, участвующие в укреплении клеточной стенки и отложении каллозы.АФК также действуют как локальные и системные вторичные мессенджеры, запускающие дополнительные иммунные реакции, включая движение устьиц. Закрытие устьиц в ответ на различные стрессы вызывается потерей тургора замыкающих клеток, что обусловлено модуляцией ионных каналов (Thor et al., 2020; Wu et al., 2020). Сложная сигнальная сеть, включающая продукцию АФК, регулирует эти каналы (Kim et al., 2010; Kollist et al., 2014). Обработка АСМ первых листьев посредством инокуляции грибком вызывала быстрое накопление H ₂ O ₂ ниже места проникновения на необработанных АСМ третьих листьях (Lin and Ishii, 2009; Park et al., 2019). Эндогенный SA необходим как для продукции апопластных АФК, так и для закрытия устьиц, индуцируемого хитозаном в виде молекулярных паттернов, связанных с микробами (MAMPs; Prodhan et al. , 2017). Поскольку ASM является синтетическим аналогом SA, заманчиво предположить, что закрытие устьиц, вызванное ASM, тесно связано с продукцией ROS.

Материалы и методы

Растительные материалы и химическая обработка

Редька японская ( Raphanus sativus var. longipinnatus ) cv. Во всех экспериментах использовали растения Нацуцукаса. Проростки выращивали в горшках диаметром 9 см при 24°С с интенсивностью света 200 мкмоль/(м ² с) и 16 ч света/8 ч темноты в ростовой камере или содержали в теплице при естественном фотопериоде 21,2 ± 2,4°С. ASM (продаваемый как ACTIGARD®) был предоставлен компанией Syngenta в виде 50% (д.в.) вододиспергируемого гранулированного состава и растворен в воде. Чтобы оценить влияние ASM на защиту растений, четвертые листья японской редьки обрабатывали ASM (100 частей на миллион) методом погружения через 3 недели после посева или когда разворачивались пятые настоящие листья.Салицилгидроксамовая кислота (SHAM) и хлорид дифениленйодония (DPI) были получены от Sigma-Aldrich (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США). Растения обрабатывали ASM за 4 часа, 1 день и 1 неделю до инокуляции Pcal (дополнительная фигура 1). Растения обрабатывали погружением в воду или инокулировали водой в качестве контроля.

Бактериальные штаммы и условия роста

Патогенные Pseudomonas cannabina pv. alisalensis , штамм KB211 ( Pcal ; Sakata et al., 2019) был любезно предоставлен Экспериментальной станцией овощных и декоративных культур Нагано, Нагано, Япония. Pcal выращивали при 28°C в течение 24 ч на агаровой среде Kings B (KB; King et al., 1954). Для инокулята бактерии суспендировали в стерильном дистиллированном H ₂ O и измеряли плотность клеток при 600 нм (OD ₆₀₀) с использованием измерителя плотности клеток Biowave CO8000 (biochrom, Кембридж, Великобритания).

Бактериальная инокуляция

Растения инокулировали распылением бактериальной суспензии в стерильной дистиллированной воде, содержащей 0.025% Silwet L-77 (биомедицинские науки, Токио, Япония). Для измерения площади поражения Pcal и симптомов заболевания растения японской редьки инокулировали бактериальной суспензией [5 × 10 ⁷ колониеобразующих единиц (КОЕ)/мл] до стока. Для анализа устьиц использовали метод погружения-инокуляции. Для анализа роста бактерий растения редьки японской инокулировали бактериальной суспензией (5 × 10 ⁷ КОЕ/мл). Затем растения инкубировали в ростовых камерах при относительной влажности приблизительно 100% в течение первых 24 часов, затем при относительной влажности приблизительно 70% до конца эксперимента.Площадь поражения и бактериальную популяцию оценивали через 1 неделю после инокуляции (wpi).

Для оценки роста бактерий в редьке японской после инокуляции методом погружения измеряли внутреннюю бактериальную популяцию. Собирали инокулированные растения, и весь инокулированный лист использовали для количественного определения бактериальной популяции.Поверхность листьев стерилизовали 10% H ₂ O ₂ в течение 3 мин. После трехкратной промывки стерильной дистиллированной водой листья гомогенизировали в стерильной дистиллированной воде и разведенные образцы высевали на твердую агаризованную среду KB. Через два или три дня после посева образцов разведения бактериальные КОЕ подсчитывали и нормализовали как КОЕ на грамм, используя общую массу листа. Популяции бактерий оценивали в четырех независимых экспериментах.

Количественная ОТ-ПЦР в реальном времени

Для определения профилей экспрессии генов защиты японской редьки в ответ на ASM растения обрабатывали погружением в воду в качестве контроля или ASM на четвертых листьях.Через 4 часа общую РНК экстрагировали с помощью RNAiso Plus (Takara Bio, Shiga, Japan) в соответствии с протоколом производителя и использовали для количественной ОТ-ПЦР в реальном времени (qRT-PCR), как описано (Ishiga and Ichinose, 2016). Два микрограмма тотальной РНК обрабатывали gDNA Remover (TOYOBO, Осака, Япония) для удаления геномной ДНК, а обработанную ДНКазой РНК подвергали обратной транскрипции с использованием набора ReverTra Ace® qPCR RT Kit (TOYOBO). Затем кДНК (1:50) использовали для RT-qPCR с праймерами, показанными ниже, с THUNDERBIRD® qPCR Mix (TOYOBO) на системе реального времени с термоциклером Dice Real Time System (Takara Bio).Редис ген глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы ( GAPDH ) использовали в качестве внутреннего контроля. Средние значения CT, рассчитанные с использованием метода максимума второй производной из трех образцов, использовали для определения выражения кратности по сравнению с контролями (нулевое время). Праймеры, используемые в амплификации ген-специфической ПЦР для PR1 , были 5′-AAAGCTACGCCGACCGACTACGAG-3′ и 5′-CCAGAAAAGTCGGCGCTACTCCA-3′; для PR2 , 5′-GTACGCTCTGTTCAAACCGACCC-3′ и 5′-TTTCCAACGATCCTCCGCCTGA-3′; для PR3 , 5′-TCTTTGGTCAGACTTCCCACGAG-3′ и 5′-GATGGCTCTTCCACACTGTCCGTA-3′; и для GAPDH , 5′-CGCTTCCTTCAACATCATTCCCA-3′ и 5′-TCAGATTCCTCCTTGATAGCCTT-3′ в соответствии с предыдущим исследованием (Alkooranee et al., 2015).

Анализ устьиц

Статистический анализ

Все данные представлены как среднее с SE. Все статистические анализы проводились с использованием EZR (Медицинский центр Сайтама, Медицинский университет Дзичи, Сайтама, Япония; Канда, 2013 г. ), графического пользовательского интерфейса для R (версия 3.6,3; R Фонд статистических вычислений, Вена, Австрия). Двусторонний ANOVA и критерий достоверной значимой разницы Тьюки (HSD) использовались для анализа ширины устьичной апертуры. Различия p < 0,05 считали статистически значимыми.

Результаты

ASM подавляет развитие болезни

Pcal в японской редьке и вызывает SAR

Чтобы выяснить, эффективно ли ASM подавляет развитие болезни Pcal в растениях японской редьки, растения инокулировали Pcal 1 день, 4 часа, и через 1 неделю после обработки погружением ASM только на четвертом листе.Затем симптомы заболевания наблюдались через 7 дней после инокуляции (dpi; дополнительная фигура 1). Растения японской редьки, обработанные ASM, демонстрировали меньше симптомов заболевания, чем контрольные растения, обработанные водой, инокулированные Pcal , во все моменты времени после обработки ASM (дополнительная фигура 2). Мы также оценивали развитие болезни, измеряя площади поражения. Площадь поражения Pcal на обработанных ASM растениях японской редьки была значительно меньше, чем у контрольных растений, обработанных водой, даже если период предварительной обработки ASM составлял всего 4 часа (-).Кроме того, площадь поражения уменьшалась не только на листьях, обработанных АСМ, но и на необработанных верхних и нижних листьях (–). Чтобы выяснить, подавляет ли ASM рост бактерий, а также площадь поражения, мы также измерили популяцию бактерий. У редьки японской, четвертые листья, предварительно обработанные ASM в течение 4 часов, популяций Pcal были примерно в 10 раз меньше по сравнению с контрольными растениями, обработанными водой. Кроме того, через 1 день после обработки (dpt) и через 1 неделю после обработки (wpt) ASM популяции Pcal были примерно в 100 раз меньше по сравнению с таковыми в контрольной группе, обработанной водой (,).Более того, в необработанных третьем и пятом листьях популяции Pcal также были меньше по сравнению с контрольными растениями, обработанными водой (-). Эти результаты показывают, что ASM способен подавлять развитие симптомов и размножение бактерий в редьке японской после инокуляции Pcal , и этот эффект приобретается системно.

Площадь поражения (%) обработанных и необработанных листьев японской редьки ацибензолар-S-метил (АСМ) после Pseudomonas cannabina pv. alisalensis ( Pcal ) прививка. Выращенные в теплице растения японской редьки инокулировали распылением Pcal (5 × 10 ⁷ КОЕ/мл), 4 часа (A) , 1 день (B) и 1 неделю (C) после Обработка погружением ASM (100 частей на миллион) на четвертых листьях. Симптомы заболевания четвертых листьев, обработанных ASM, и необработанных верхних (пятых) и нижних (третьих) листьев контролировали путем измерения площадей поражения через 1 неделю после инокуляции (wpi). Вертикальные полосы указывают SE для четырех независимых повторений.Звездочки указывают на значительное отличие от контроля обработки воды в t -тесте (^* p < 0,05; ^** p < 0,01).

Бактериальные популяции обработанных и необработанных ASM системных листьев японской редьки после инокуляции Pcal . Трехнедельные растения японской редьки были инокулированы распылением суспензий Pcal (5 × 10 ⁷ КОЕ/мл), 4 часа (A) , 1 день (B) и 1 неделя (C ) после обработки погружением ASM (100 частей на миллион) на четвертых листьях.Бактериальные популяции в обработанных ASM четвертых листьях и необработанных системных верхних (пятых) и нижних (третьих) листьях определяли путем посева на селективную среду, как описано в разделе «Методы» на 1-wpi. Вертикальные полосы указывают SE для трех независимых экспериментов. Звездочки указывают на значительное отличие от контроля обработки воды в тесте t (^* p <0,05).

ASM активирует устьичную защиту против

Pcal

Чтобы выяснить, активирует ли ASM устьичную защиту на японской редьке, мы наблюдали реакцию устьиц после инокуляции Pcal обработанных ASM четвертых листьев и их необработанных третьего и пятого листьев. .Через 4 ч после обработки ASM все тестируемые листья (четвертые листья, обработанные ASM, а также необработанные верхние и нижние листья) демонстрировали закрытие устьиц после инокуляции Pcal , в отличие от контрольных растений, не обработанных ASM (-). Между тем, через 1 дпт и 1 дпт после обработки ASM все тестируемые листья, за исключением третьих листьев при 1 дпт, демонстрировали закрытие устьиц независимо от инокуляции Pcal (-). Эти результаты показывают, что обработка ASM подавляла открытие устьиц, по крайней мере, на 1 dpt, и этот эффект сохранялся в течение недели.Кроме того, эффект распространялся на необработанные системные листья (,,,,,). Через 1 дпт и 1 дпт после обработки ASM все тестируемые листья демонстрировали аналогичный или повышенный уровень закрытия устьиц после инокуляции Pcal по сравнению с контрольными растениями без инокуляции. Эти результаты показывают, что ASM активирует устьичную защиту против Pcal на японской редьке локально и системно.

Ширина устьичных отверстий (мкм) обработанных и необработанных ASM системных листьев растений редьки японской после инокуляции Pcal .Четвертые листья японской редьки погружали в ASM (100 ppm) и инокулировали погружением суспензий Pcal (1 × 10 ⁸ КОЕ/мл) 4 ч (A–C) , 1 день ( D-F) и 1 неделя (G-I) после лечения ASM. Были получены микроскопические изображения обработанных ASM четвертых листьев (B,E,H) и необработанных системных третьих листьев (A,D,G) и пятых листьев (C,F,I) 4 h после инокуляции (hpi) Pcal с использованием оптического микроскопа Nikon (Eclipse 80i).Затем была проанализирована ширина устьичных отверстий (мкм) по изображению J с использованием не менее 100 устьиц. На всех гистограммах вертикальные полосы указывают SE для трех биологических повторностей. Значимые факторы (SF) показывают, были ли два независимых фактора, обработка ASM (A) и инокуляция Pcal (P), и/или их взаимодействие, I (A × P), статистически значимыми (двухсторонний ANOVA, р < 0,05). Когда взаимодействие было значимым, выполнялся тест Тьюки на честно значимую разницу (HSD).Разные буквы указывают на значительные различия между лечением/прививкой ( p < 0,05). p значения двухфакторного дисперсионного анализа показаны в дополнительной таблице 1.

Применение SHAM уменьшает индуцированное ASM закрытие устьиц в местных и системных листьях японской редьки

Активные формы кислорода (АФК) являются важными вторичными мессенджерами в устьичном иммунитете (Джоши-Саха и др., 2011). Закрытие устьиц фитогормоном SA требует продукции АФК пероксидазами клеточной стенки (Mori et al., 2001; Хокон и др., 2011). Поскольку ASM является синтетическим аналогом SA, мы исследовали, опосредована ли передача сигналов ASM-индуцированного закрытия устьиц АФК с использованием ингибитора пероксидазы, SHAM, и ингибитора NADPH-оксидазы, дифенилен-йодония (DPI). Через 1 неделю после обработки погружением ASM на четвертые листья обработанные ASM листья и необработанные третий и пятый листья обрабатывали погружением с помощью SHAM (1 мМ) или DPI (10 мкМ). Затем через 4 ч после химической обработки исследовали устьичные отверстия каждого листа.ASM-индуцированное закрытие устьиц подавлялось SHAM (-), что указывает на то, что пероксидазы клеточной стенки могут участвовать в опосредовании продукции ROS во время ASM-индуцированного закрытия устьиц. И наоборот, экзогенное применение DPI не ингибировало закрытие устьиц, вызванное ASM (-). Мы получили аналогичные результаты для листьев, обработанных ASM, и их необработанных системных листьев, одновременно инокулированных Pcal при обработке SHAM или DPI (дополнительные рисунки 3A-C). Эти результаты свидетельствуют о том, что АФК, продуцируемые пероксидазами клеточной стенки, вероятно, по крайней мере частично опосредуют передачу сигналов при закрытии устьиц, индуцированном ASM.

Ширина устьичных отверстий (мкм) в растениях японской редьки, обработанных ASM, после применения SHAM или DPI. Четвертые листья японской редьки обрабатывали погружением с ASM (100 ppm), а через 1 неделю SHAM (1 мМ) и DPI (10 мкМ) обрабатывали погружением на четвертые листья, обработанные ASM, и необработанные системные верхние ( пятый) и нижний (третий) лист. Изображения под микроскопом третьего (A) , четвертого (B) и пятого (C) листьев были получены через 4 часа после обработки химическими веществами с использованием оптического микроскопа Nikon (Eclipse 80i).Затем была проанализирована ширина устьичных отверстий (мкм) по изображению J с использованием не менее 100 устьиц. На всех гистограммах вертикальные полосы указывают SE для трех биологических повторностей. Значимые различия ( p < 0,05) обозначены разными буквами на основе теста Тьюки HSD.

ASM индуцирует экспрессию генов, связанных с защитой, у японской редьки

ASM также индуцирует экспрессию генов, связанных с защитой, включая белки PR у Arabidopsis thaliana , Brachypodium distachyon , табака, огурца и капусты (Wendehenne et al., 1998; Накашита и др., 2002; Ясуда и др., 2008 г.; Козай и др., 2018a,b; Ишига и др., 2020). Чтобы исследовать влияние обработки ASM на экспрессию генов защиты японской редьки, мы исследовали профили экспрессии PR1 , PR2 и PR3 в ответ на ASM. Экспрессия PR1 , PR2 и PR3 значительно индуцировалась в четвертых листьях через 4 часа после обработки АСМ (-). Кроме того, как в необработанных верхних, так и в нижних листьях экспрессия всех генов индуцировалась или имела тенденцию к индукции (–).Эти результаты показывают, что ASM индуцирует экспрессию генов, связанных с защитой, как в локальных, так и в системных листьях японской редьки.

Профили экспрессии генов PR1 , PR2 и PR3 растения японской редьки в обработанных ASM и необработанных системных листьях. Четвертые листья 3-недельных растений редьки японской обрабатывали ASM (100 частей на миллион) или водой в качестве контроля. Через 4 часа экспрессия PR1
(А) , PR2
(В) и PR3
(C) в обработанных ASM четвертых листьях и необработанных системных верхних (пятых) и нижних (третьих) листьях определяли с помощью количественной ПЦР с обратной транскрипцией в реальном времени (RT-qPCR) с наборами ген-специфических праймеров. Экспрессию нормализовали с помощью глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы ( GAPDH ). Вертикальные полосы указывают SE для трех биологических повторностей. Звездочки указывают на достоверное отличие от водного контроля в t -тесте (^* p < 0,05; ^** p < 0,01).

Обсуждение

Существует повышенный спрос на разработку устойчивых стратегий борьбы с болезнями. ASM прогнозируется как дополнительный инструмент борьбы с болезнями для защиты многочисленных сельскохозяйственных культур от патогенов без появления химически устойчивых штаммов.Наши результаты ясно показали, что обработка погружением ASM эффективно подавляла образование повреждений Pcal и размножение бактерий на растениях японской редьки (, Дополнительный рисунок 2). Ранее мы также продемонстрировали, что пропитка почвы ASM подавляла развитие болезни Pcal , связанной с уменьшением популяции бактерий в капусте (Ishiga et al., 2020). Эти результаты показывают, что ASM является мощным средством против Pcal , возбудителя бактериального ожога крестоцветных растений.

Наиболее важным открытием было то, что МАС значительно усилила системную активацию защитного ответа. Снижение развития болезней и роста бактерий наблюдалось не только на обработанных четвертых листьях, но и на необработанных третьих и пятых листьях (дополнительный рисунок 2). Кроме того, ASM запускал защиту на основе устьиц и индукцию экспрессии генов, связанных с SAR, как на обработанных, так и на необработанных листьях. Cools and Ishii (2002) продемонстрировали, что предварительная обработка ASM первых листьев огурца защищала целые растения от заражения вирулентным грибковым патогеном Colletotrichum orbiculare .Через три часа после обработки ASM на первых листьях ASM-индуцированный системный прайминг экспрессии PAL1 в растениях огурца происходил быстро, с усиленной экспрессией на третьих листьях (Cools and Ishii, 2002). Интересно, что наши результаты показали, что ASM-индуцированная системная защита была приобретена не только на необработанных верхних листьях, но и на необработанных нижних листьях (4). Kubota и Abiko (2000) продемонстрировали, что через 7 дней после первой инокуляции Colletotrichum lagenarium и Pythium ultimum на семядолях и первичных листьях огурца наблюдалась индуцированная устойчивость к контрольной инокуляции этими патогенными грибами в гипокотиле.Эти результаты означают, что внекорневая обработка листьев может предотвратить заболевание нижних частей растения, в том числе гипокотилей и корней (Kubota and Abiko, 2000). Важно отметить, что Pcal вызывает обесцвечивание гипокотиля и корня японской редьки (Takikawa and Takahashi, 2014). Ожидается, что системная защита, вызванная ASM, может стать мощным инструментом борьбы с бактериальным ожогом японской редьки.

Профили экспрессии генов PR1 , PR2 и PR3 индуцировались по крайней мере через 4 часа после обработки ASM как в обработанных, так и в необработанных листьях (). ASM индуцировал экспрессию PR1 , PR2 и PR5 в A. thaliana и капусте (Uknes et al., 1992; Lawton et al., 1996; Ishiga et al., 2020). ASM также индуцировал экспрессию PR1 , PR3 и PR5 в табаке (Mandal et al., 2008). У Raphanus alboglabra , PR1 , PR2 и PR3 экспрессия была усилена грибковым патогеном, Erysiphe Crusiferarum (Alkooranee et al., 2015). Эти результаты позволяют предположить, что PR1 , PR2 и PR3 могут служить маркерными генами SAR у японской редьки.

В наших результатах эффект контроля над заболеванием, вызванный ASM, был очевиден через 4 часа (, ), а связанная с SAR экспрессия генов также индуцировалась через 4 часа (). Бензо(1,2,3)тиадиазол-7-карбоновая кислота (ацибензолар), но не сама АСМ, была обнаружена в необработанных третьих листьях 3 dpt на первых листьях огурца (Ishii et al., 2002). SABP2 катализирует превращение ASM в ацибензолар, вызывая SAR (Tripathi et al. , 2010). Таким образом, ацибензолар может действовать аналогично СА, активируя NPR1 и SAR. Учитывая, что ацибензолар не был обнаружен в необработанных листьях огурца на 1 dpt (Ishii et al., 2002), заманчиво предположить, что предполагаемые сигнальные молекулы быстро перемещаются из листьев, обработанных ASM, в необработанные листья японской редьки. Было идентифицировано несколько кандидатов на этот сигнал дальнего действия, включая метилсалицилат (MeSA), производный от SFD1/GLY1 G3P-зависимый сигнал, белок-переносчик липидов DIR1, азелаиновую кислоту дикарбоновой кислоты (AzA), абиетандитерпеноид дегидроабиртинал. (DA), жасмоновая кислота (JA) и N -гидроксипипеколиновая кислота ( N -гидрокси-Pip; Dempsey and Klessig, 2012; Chen et al., 2018; Хартманн и др., 2018). Среди них N -гидрокси-Pip действует как первичный регулятор SAR (Návarová et al., 2012; Zeier, 2013; Chen et al., 2018; Hartmann et al., 2018). У A. thaliana эти ответы включают накопление камалексина (фитотоксина) и экспрессию связанных с защитой генов, включая ALD1 , FMO1 и PR1 (Bernsdorff et al. , 2016). Потребуется дальнейший анализ для выяснения мобильных сигналов, вызывающих SAR у японской редьки.

ASM индуцировал устьичную защиту от Pcal в течение 4 часов как у капусты, так и у японской редьки (; Ishiga et al., 2020). Мы также показали, что закрытие устьиц, вызванное ASM, подавлялось ингибитором пероксидазы, SHAM, но не ингибитором NADPH-оксидазы, DPI (дополнительная фигура 3). Хокон и др. (2011) сообщили, что SA-индуцированное закрытие устьиц сопровождалось продукцией ROS, опосредованной пероксидазой, у A. thaliana . Следовательно, эти результаты предполагают, что закрытие устьиц, вызванное ASM, тесно связано с продукцией ROS через пероксидазу.Наши результаты также показали, что ASM-индуцированная защита на основе устьиц наблюдалась не только на обработанных листьях, но и на необработанных листьях. Lin и Ishii (2009) продемонстрировали, что быстрое накопление H ₂ O ₂ происходило в жидкостях ксилемы стебля огурца во время SAR, вызванного ASM. Takahashi and Shinozaki (2019) сообщили, что накопление АБК, опосредованное световым стрессом, индуцирует волну ROS/Ca ²⁺, распространяющуюся от локальных листьев к системным листьям с высокой скоростью передачи, предполагая, что локальная волна ROS/Ca ²⁺ функционирует как Дальний сигнал для активации закрытия устьиц в условиях легкого стресса.Следовательно, возможно, что АФК, индуцированные обработкой АСМ, активируют закрытие устьиц в системном ответе во время инфицирования патогеном.

Заявление о доступности данных

Вклад авторов

Н.С., С.Т. и Ю.И. разработали исследование и написали рукопись. NS, TI, ST и YI проводили эксперименты, собирали и анализировали данные. Все авторы внесли свой вклад в статью и одобрили представленную версию.

Конфликт интересов

YI получила средства на исследования от Syngenta Japan.

Остальные авторы заявляют, что исследование проводилось в отсутствие каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Сноски

Финансирование. Эта работа была частично поддержана Исследовательским проектом по устойчивой продовольственной безопасности в виде операционного гранта от Национальной университетской корпорации и Японского агентства по науке и технологиям (JST) Исследовательские исследования для передовых технологий (ERATO) NOMURA. Проект контроля микробных сообществ, Номер гранта: JPMJER1502.

Ссылки

Alkooranee J.T., Yin Y. , Aledan T.R., Jiang Y., Lu G., Wu J., et al.. (2015). Системная устойчивость к мучнистой росе у Brassica napus (AACC) и Raphanus alboglabra (RRCC) с помощью Trichoderma harzianum Th22. PLoS Один
10:e0142177. 10.1371/journal.pone.0142177, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Bernsdorff F., Döring AC, Gruner K., Schuck S., Bräutigam A., Zeier J. ( 2016). Пипеколиновая кислота управляет системной приобретенной устойчивостью растений и защитным праймингом посредством зависимых от салициловой кислоты и независимых путей.Растительная клетка
28, 102–129. 10.1105/tpc.15.00496, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Chen Y.C., Holmes E.C., Rajniak J., Kim J.G., Tang S., Fischer C.R., et al. . (2018). N-гидроксипипеколиновая кислота является мобильным метаболитом, который индуцирует устойчивость к системным заболеваниям у арабидопсиса . проц. Натл. акад. науч. США.
115, Е4920–Е4929. 10.1073/pnas.18052
, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Читракар Р., Мелотто М.(2010). Оценка реакции устьиц на живые бактериальные клетки с использованием визуализации всего листа. Дж. Вис. Эксп.
44:2185. 10.3791/2185, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Cools HJ, Ishii H. (2002). Предварительная обработка растений огурца ацибензолар-S-метилом системно активирует ген фенилаланин-аммиачной лиазы ( PAL1 ) для усиления экспрессии при поражении патогенным грибком. Физиол. Мол. Завод Патол.
61, 273–280. 10.1006/pmpp.2003.0439 [CrossRef] [Google Scholar]
Демпси Д.А., Клесиг Д. Ф. (2012). SOS — слишком много сигналов системной приобретенной резистентности?
Тенденции Растениевод.
17, 538–545. 10.1016/j.tplants.2012.05.011, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Doke N. (1983). Генерация супероксид-аниона протопластами клубней картофеля при гиперчувствительной реакции на компоненты стенки гиф Phytophthora infestans и специфическое ингибирование реакции супрессорами гиперчувствительности. Физиол. Завод Патол.
23, 359–367. 10.1016/0048-4059(83)
-6 [CrossRef] [Google Scholar]
Fobert P.Р., Депре К. (2005). Редокс-контроль системной приобретенной резистентности. Курс. мнение биол. растений
8, 378–382. 10.1016/j.pbi.2005.05.003, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Hartmann M., Zeier T., Bernsdorff F., Reichel-Deland V., Kim D., Hohmann M., и другие. . (2018). N-гидроксипипеколевая кислота, генерируемая флавинмонооксигеназой, является критическим элементом системного иммунитета растений. Клетка
173, 456.e16–469.e16. 10.1016/j.cell.2018.02.049, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Ишига Ю., Ичиносе Ю. (2016). Pseudomonas syringae pv. томат OxyR необходим для вирулентности томатов и Arabidopsis . Мол. Взаимодействие растительных микробов.
29, 119–131. 10.1094/MPMI-09-15-0204-R, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Ишига Т., Иида Ю., Саката Н., Угаджин Т., Хирата Т., Танигучи С., и другие. (2020). Ацибензолар-S-метил активирует устьичную защиту от Pseudomonas cannabina pv. alisalensis в капусте.Дж. Генерал Плант Патол.
86, 48–54. 10.1007/s10327-019-00883-5 [CrossRef] [Google Scholar]
Исии Х., Като Т., Яманака М., Кулс Х., Сугияма Т. (2002). Активность индукции устойчивости к системным заболеваниям и метаболизм ацибензолар-S-метила в огурце (аннотация на японском языке). Абстр. 27-я анна. Встретить. наук о пестицидах. соц. Япония.
Джоши-Саха А., Валон К., Люн Дж. (2011). Совершенно новый СТАРТ: восприятие и трансдукция абсцизовой кислоты в замыкающей клетке. науч. Сигнал.
4:re4. 10.1126/sciсигнал.2002164, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Jung HW, Tchaplinski TJ, Wang L., Glazebrook J., Greenberg JT (2009). Примирование системного иммунитета растений. Наука
324, 89–91. 10.1126/science.1170025, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Канда Ю. (2013). Исследование свободно распространяемой простой в использовании программы «ЭЗР» для медицинской статистики. Пересадка костного мозга.
48, 452–458. 10.1038/bmt.2012.244, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Хокон А.Р., Окума Э., Хоссейн М. А., Мунемаса С., Ураджи М., Накамура Ю. и др. . (2011). Участие внеклеточного окислительного взрыва в индуцированном салициловой кислотой закрытии устьиц у Arabidopsis . Окружающая среда растительной клетки.
34, 434–443. 10.1111/j.1365-3040.2010.02253.x, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Kim T. H., Böhmer M., Hu H., Nishimura N., Schroeder J. I. (2010). Сеть передачи сигналов защитных клеток: достижения в понимании передачи сигналов абсцизовой кислоты, CO ₂ и Ca ²⁺.Анну. Преподобный завод биол.
61, 561–591. 10.1146/annurev-arplant-042809-112226, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
King EO, Ward MK, Raney DE (1954). Две простые среды для демонстрации пиоцианина и флуоресцина. Дж. Лаб. клин. Мед.
44, 301–307. PMID: [PubMed] [Google Scholar]
Kollist H. , Nuhkat M., Roelfsema MR (2014). Закрытие промежутков: связывание элементов, контролирующих движение устьиц. Новый Фитол.
203, 44–62. 10.1111/nph.12832, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Kouzai Y., Кимура М., Ватанабэ М., Кусуноки К., Осака Д., Судзуки Т. и др. . (2018а). Иммунитет, зависящий от салициловой кислоты, способствует устойчивости риса к Rhizoctonia solani , некротрофному грибковому возбудителю гнили, и Brachypodium distachyon . Новый Фитол.
217, 771–783. 10.1111/nph.14849, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Kouzai Y., Noutoshi Y., Inoue K., Shimizu M., Onda Y., Mochida K. (2018b ). Бензотиадиазол, индуктор защиты растений, негативно регулирует устойчивость к гнили у Brachypodium distachyon .науч. Респ.
8:17358. 10.1038/s41598-018-35790-w, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Kubota M., Abiko K. (2000). Индуцированная устойчивость гипокотиля огурца путем заражения листьев Colletotrichum lagenarium . Дж. Генерал Плант Патол.
66, 128–131. 10.1007/PL00012933 [CrossRef] [Google Scholar]
Kunz W., Schurter R., Maetzke T. (1997). Химия бензотиадиазольных активаторов растений. Пестик. науч.
50, 275–282. 10.1002/(SICI)1096-9063(199708)50:4<275::AID-PS593>3.0.CO;2-7 [CrossRef] [Google Scholar]
Lawton K.A., Friedrich L., Hunt M., Weymann K., Delaney T., Kessmann H., et al. . (1996). Бензотиадиазол индуцирует устойчивость к болезням у Arabidopsis путем активации системного пути передачи сигнала приобретенной устойчивости. Плант Дж.
10, 71–82. 10.1046/j.1365-313X.1996.10010071.x, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Lin T., Ishii H. (2009). Накопление H ₂ O ₂ в ксилемной жидкости стеблей огурца во время ASM-индуцированной системной приобретенной устойчивости (SAR) связано с повышенной активностью LOX и временным накоплением шикимовой кислоты.Евро. Дж. Плант Патол.
125, 119–130. 10.1007/s10658-009-9464-9 [CrossRef] [Google Scholar]
Мандал Б. , Мандал С., Чинос А.С., Мартинес Н., Калбрет А.К., Паппу Х.Р. (2008). Биологический и молекулярный анализ ацибензолар-S-метил-индуцированной системной приобретенной устойчивости табака дымовой сушки к вирусу пятнистого увядания томатов. Фитопатология
98, 196–204. 10.1094/PHYTO-98-2-0196, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Mori I.C., Pinontoan R., Kawano T., Muto S. (2001).Участие образования супероксида в закрытии устьиц, вызванном салициловой кислотой, у Vicia faba . Физиология клеток растений.
42, 1383–1388. 10.1093/pcp/pce176, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Nakashita H., Yoshioka K., Yasuda M., Nitta T., Arai Y., Yoshida S., et al. (2002). Пробеназол индуцирует системную приобретенную устойчивость табака за счет накопления салициловой кислоты. Физиол. Мол. Завод Патол.
61, 197–203. 10.1006/pmpp.2002.0426 [CrossRef] [Google Scholar]
Нарусака Ю., Нарусака М., Хорио Т., Исии Х. (1999). Индукция устойчивости к болезням у огурцов с помощью ацибензолар-S-метила и экспрессия генов, связанных с устойчивостью. Япония. Дж. Фитопат.
65, 119–122. 10.3186/jjphytopath.65.116 [CrossRef] [Google Scholar]
Нарусака Ю., Нарусака М., Исии Х. (2001). Поиск с помощью дифференциального дисплея новых генов, участвующих в индуцированной устойчивости к болезням огурца, обработанного ацибензолар-S-метилом. Дж. Генерал Плант Патол.
67, 207–211. 10.1007/PL00013013 [CrossRef] [Google Scholar]
Наварова Х., Бернсдорф Ф., Деринг А.С., Зейер Дж. (2012). Пипеколиновая кислота, эндогенный медиатор усиления и прайминга защиты, является важным регулятором индуцируемого иммунитета растений. Растительная клетка
24, 5123–5141. 10.1105/tpc.112.103564, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Остендорп М., Кунц В., Дитрих Б., Штауб Т. (2001). Индуцированная химией устойчивость растений к болезням. Евро. Дж. Плант Патол.
107, 19–28. 10.1023/A:1008760518772 [CrossRef] [Google Scholar]
Парк П., Курихара Т., Нита М., Икеда К., Иноуэ К., Исии Х. (2019). Применение электронной микроскопии с фильтрацией энергии (EFEM) для анализа перекиси водорода и лигнина в эпидермальных стенках листьев огурца, вызванных обработкой ацибензолар-S-метилом, перед инокуляцией Colletotrichum orbiculare . Завод Патол.
68, 1624–1634. 10.1111/ppa.13095 [CrossRef] [Google Scholar]
Продхан М.Ю., Иссак М., Накамура Т., Мунемаса С., Накамура Ю., Мурата Ю. (2017). Для передачи сигналов хитозана в замыкающих клетках требуется эндогенная салициловая кислота.Бионауч. Биотехнолог. Биохим.
81, 1536–1541. 10.1080/051.2017.1332979, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Саката Н., Ишига Т., Сайто Х., Нгуен В. Т., Ишига Ю. (2019). Мутагенез транспозонов выявляет Pseudomonas cannabina pv. alisalensis оптимизирует свои факторы вирулентности для патогенности на разных хозяевах. PeerJ
7:e7698. 10.7717/peerj.7698, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Shah J., Zeier J. (2013). Дальняя связь и усиление сигнала при системной приобретенной резистентности.Передний. Растениевод.
4:30. 10.3389/fpls.2013.00030, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Takahashi F., Ochiai M., Ikeda K., Takikawa Y. (2013). Устойчивость к стрептомицину и меди у Pseudomonas cannabina pv. alisalensis (аннотация на японском языке). Япония. Дж. Фитопат.
35. [Google Scholar]
Такахаси Ф., Шинозаки К. (2019). Передача сигналов на большие расстояния в реакции растений на стресс. Курс. мнение биол. растений
47, 106–111. 10.1016/j.pbi.2018.10.006, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Такикава Ю., Такахаши Ф. (2014). Бактериальная пятнистость листьев и фитофтороз крестоцветных (Brassicaceae), вызываемые Pseudomonas syringae pv. maculicola и P. cannabina pv. алисаленсис . Дж. Генерал Плант Патол.
80, 466–474. 10.1007/s10327-014-0540-4 [CrossRef] [Google Scholar]
Thor K., Jiang S., Michard E., George J., Scherzer S., Huang S., et al. . (2020). Проницаемый для кальция канал OSCA1.3 регулирует устьичный иммунитет растений. Природа
585, 569–573. 10.1038/s41586-020-2702-1, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Tripathi D. , Jiang Y. L., Kumar D. (2010). SABP2, метилсалицилатэстераза, необходима для системной приобретенной устойчивости, индуцированной ацибензолар-S-метилом у растений. ФЭБС лат.
584, 3458–3463. 10.1016/j.febslet.2010.06.046, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Укнес С., Мауч-Мани Б., Мойер М., Поттер С., Уильямс С., Динчер С. и др. . (1992). Приобретена устойчивость у Arabidopsis . Растительная клетка
4, 645–656. 10.1105/tpc.4.6.645, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Wang Y., Schuck S., Wu J., Yang P., Döring AC, Zeier J., и другие. . (2018). Регуляторная петля MPK3/6-WRKY33-ALD1-пипеколиновая кислота способствует развитию системной приобретенной резистентности. Растительная клетка
30, 2480–2494. 10.1105/tpc.18.00547, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Wendehenne D., Durner J., Chen Z., Klessig D.F. (1998). Бензотиадиазол, индуктор защитных сил растений, ингибирует каталазу и аскорбатпероксидазу. Фитохимия
47, 651–657. 10.1016/S0031-9422(97)00604-3 [CrossRef] [Google Scholar]
Wu F., Chi Y., Jiang Z., Xu Y., Xie L., Huang F., et al. . (2020). Сенсор перекиси водорода HPCA1 представляет собой киназу рецептора LRR в Arabidopsis . Природа
578, 577–581. 10.1038/s41586-020-2032-3, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Ясуда М., Исикава А., Дзикумару Ю., Секи М., Умэдзава Т., Асами Т. и др. . (2008). Антагонистическое взаимодействие между системной приобретенной устойчивостью и опосредованной абсцизовой кислотой реакцией на абиотический стресс у Arabidopsis . Растительная клетка
20, 1678–1692. 10.1105/tpc.107.054296, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Zeier J. (2013). Новое понимание регуляции иммунитета растений путями метаболизма аминокислот. Окружающая среда растительной клетки.
36, 2085–2103 гг. 10.1111/pce.12122, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Чжао Л., Фуонг Л. Т., Луан М. Т., Фитрианти А. Н., Мацуи Х., Накагами Х. и др. (2019). Пероксидаза класса III PRX34 является компонентом устойчивости к болезням Arabidopsis . Дж. Генерал Плант Патол.
85, 405–412. 10.1007/s10327-019-00863-9 [CrossRef] [Google Scholar]

описание технологии, характеристики и обзоры

Любая женщина мечтает о безупречной прическе. Многие ежедневно пользуются утюжком и плойкой. Этот прием ухудшает состояние волос и ослабляет их.Со временем волосы сильно выпадают и становятся чрезмерно ломкими. Многие девушки считают, что биотизация на средние волосы поможет избежать негативных последствий. Благодаря этой процедуре прическа всегда будет выглядеть безупречно. Это так? Процедура биокапинга имеет массу нюансов. Более подробную информацию о них вы можете найти в нашей статье.

Что такое биоуголь? Общая информация о процедуре

Многие путают биозавивку с химической процедурой. У них огромное количество отличий.Биотические волосы средней длины появились семнадцать лет назад. Парикмахеры утверждают, что эта процедура исключает все факторы, способствующие ухудшению состояния волос. В косметических средствах, которые используются для биозавивки, нет вредных веществ, разрушающих структуру волос.

Химические вещества, входящие в состав косметических продуктов, также безвредны для кожи. В том случае, если биозавивка на средние волосы была проведена правильно, они приобретают здоровый блеск и эластичность.

Сегодня процесс биозавивки можно совместить с реконструкцией. Благодаря этому можно не только сделать волосы безупречными, но и улучшить их состояние. Процесс искусственной волны в среднем длится около двух часов. Перед процедурой специалист должен внимательно изучить структуру волос, чтобы подобрать наиболее подходящую концентрацию препарата.

Если прическа имеет ослабленный вид, то биовававка на средние волосы начнется с оздоровительных процедур. Режущие концы обрезаются горячими ножницами.Благодаря этому волосы станут более ухоженными и привлекательными.

Несколько особенностей процедуры

Среди представительниц слабого пола особой популярностью пользуется биотическая молния на средние волосы. Особенности, которые присутствуют во время процедуры, должна знать каждая девушка, решившаяся на нее. Перед приготовлением биоугля специалист должен проверить чувствительность женщины к средству. Препарат наносят на локтевую часть с внутренней стороны. Если внешний вид кожи не изменился, то можно смело приступать к процедуре.

Специалист должен очистить волосы от возможного загрязнения шампунем. После этого на некоторое время наносится средство, благодаря которому локоны сохранят форму. Для безупречной укладки специалисты используют бигуди разного размера в зависимости от предпочтений девушки.

Разные виды локонов

Многие девушки не знают, как после процедуры биотики будут выглядеть средние волосы. Обладательницам круглого лица рекомендуются крупные локоны. Благодаря этому удается подчеркнуть достоинства и скрыть недостатки.Девушкам с ярко выраженным овальным типом лица такая прическа не подойдет. Это сделает его менее выраженным и привлекательным. Для каждого человека подбираются биотические волосы. Крупные локоны на средние волосы не всегда подходят. Наиболее выгодно они смотрятся на длинной прическе.

В последнее время многие девушки отказываются от слишком длинных причесок. Подойдет ли им биозавивка волос? Средние локоны прекрасно смотрятся на каскадных стрижках. Они придают волосам дополнительный объем.

Мелкие локоны отлично подойдут обладательницам короткой длины волос. У многих ровная или асимметричная челка.Подойдет ли этим девушкам биозавивка волос? На средние волосы с челкой чаще всего накручивают самые маленькие в плане бигуди. Девушка может выбрать вариант биозавивки волос как с челкой, так и без нее.

За счет небольшого размера локонов волосы приобретут дополнительный объем. Такие волосы легко укладывать.

Положительные качества процедуры

Биозавивка на средние волосы обладает массой положительных качеств. Девушки решаются на такую процедуру не случайно. Благодаря этому можно значительно сэкономить время на ежедневную укладку волос.Эффект от процедуры сохраняется более полугода. Эта прическа всегда выглядит ухоженно и привлекательно. Процедура имеет минимум противопоказаний.

Специальные продукты не включают опасные вещества. Именно по этой причине состояние волос после процедуры не ухудшается. Кудри имеют довольно естественный вид. Не наносит вреда биозавивке и коже головы.

Эффект от процедуры не такой продолжительный. Для многих девушек это плюс, ведь таким образом можно часто менять свой образ.Биозавивка подходит для волос любой длины. Высококвалифицированный специалист подскажет, какие локоны на ваших волосах будут смотреться наиболее выигрышно.

Все виды биозавивки. Стоимость процедуры

Существует множество видов биозавивки. С ними желательно ознакомиться перед процедурой. Один из самых популярных методов – японский. Этот тип отличается увлажняющим составом. Среди компонентов препарата есть коллаген. Это вещество максимально долго удерживает влагу внутри волос.Благодаря этому они перестанут быть ломкими и сухими.

В состав японских препаратов также входит экстракт чайного листа, протеины и многие другие вещества. Известно, что лучше всего подходит японская биозавивка на волосы средней длины.

Еще один популярный метод — итальянский. Эта процедура идеальна для обладательниц коротких волос или тех, кто хочет получить самые маленькие локоны.

Считается самой безопасной биозавивкой с частицами шелка. Этот метод идеален для тех, кто желает восстановить структуру волос и вернуть им ухоженный вид.

Стоимость биозавивки для разных девушек может существенно различаться. Цена зависит от густоты и длины волос. Как правило, стоимость химической завивки на прическу средней длины колеблется от двух до пяти тысяч рублей. Однако в некоторых магазинах это может стоить девушке немного дороже.

Несколько недостатков процедуры

Некоторые девушки, попробовавшие биозавивку, имеют несколько недостатков этой процедуры. Утверждают, что после нее на волосах остается стойкий и неприятный аромат.Особенно сильно это ощущается в том случае, если волосы мокрые.

Девушки, решившие сделать биозавивку на распущенные и поврежденные волосы, отмечают, что локоны распределяются неравномерно. В разных местах завитки имеют разную упругость и размер. Именно по этой причине им приходится регулярно использовать плойку на проблемных прядях.

Девушки также отмечают, что в случае, если есть какие-то проблемы с кожей головы, велика вероятность, что после процедуры они усугубятся. Чтобы избавиться от них, вам нужно будет приобрести специальные средства.

Противопоказания

Вертикальная биозавивка на средние волосы имеет противопоказания. Эта процедура не рекомендуется беременным и кормящим женщинам. В том случае, если у девушки есть аллергическая реакция на что-то, вполне вероятно, что препараты для биозавивки ей тоже не подойдут.

Перед процедурой тщательно осмотреть кожу головы, т.к. попадание препарата в раны или царапины несет опасность для здоровья. Биозавивку также не рекомендуется делать, если девушка красила или обесцвечивала волосы за две недели до процедуры.

Биозавивка дома

Многие решают сделать биозавивку самостоятельно. Однако качество локонов значительно отличается от тех, что были сделаны в салоне. Если вы все же решили провести процедуру в домашних условиях, важно заранее узнать все нюансы. Прежде всего, следует покупать только качественные и сертифицированные материалы. Если волосы в плохом состоянии, лучше обратиться к специалисту и не экспериментировать самостоятельно. Перед процедурой нужно будет тщательно вымыть голову и высушить ее, желательно без использования фена.На сухие волосы нужно будет нанести специальный раствор и зафиксировать желаемые локоны. По истечении времени, указанного на упаковке, тщательно вымойте волосы и дождитесь их полного высыхания.

Ни в коем случае нельзя перебарщивать с раствором на волосах. Если это произойдет, ваша прическа не будет выглядеть ухоженной. Волосы станут ломкими и сухими.

Как ухаживать за волосами, прошедшими процедуру биозавивки?

Любые волосы требуют бережного ухода. Если вы сделали процедуру биозавивки, то первые два дня мыть голову не рекомендуется.Также в этот период нельзя пользоваться феном. Волосы рекомендуется расчесывать деревянной расческой с редкими зубьями. Необходимо как можно скорее заменить все средства по уходу. После биозавивки нужно купить косметику для волнистых волос. Фен рекомендуется использовать только в особых случаях, но обязательно в сочетании с защитными бальзамами.

Любое окрашивание можно делать только через две недели после биозавивки. В противном случае волосы потеряют свой вид.

Отзывы о биозавивке девушек

Особой популярностью среди женщин пользуется биозавивка на средние волосы.Отзывы девушек, решившихся на процедуру, позволят взвесить все за и против.

Девушки утверждают, что локоны выглядят вполне естественно. Не чувствовал тяжести и дискомфорта. Одни подчеркивают, что волосы, конечно же, портятся, несмотря на заявления специалистов о совершенно безвредности процедуры. Лучше всего делать биозавивку на здоровых и слегка жирных волосах. В этом случае они не пострадают.

Стоит отметить, что девушки часто жалуются на то, что раствор в салоне держали 4-5 часов, а результат все равно не желателен.Настоятельно советуем вам заранее найти высококвалифицированного специалиста, благодаря которому состояние ваших волос не ухудшится. Часто парикмахеры не только экономят деньги, но и держат их на волосах слишком долго.
Многие девушки уже давно не решаются на процедуру. Однако, попав к действительно хорошему мастеру, почти все остаются в восторге от его образа.

Многие девушки утверждают, что после процедуры значительно увеличивается объем волос и улучшается их состояние.Стоит отметить, что у некоторых завивка сохраняется до нескольких лет. Длительность эффекта зависит от структуры волос.

Подведение итогов

Биозавивка волос – процедура, которая позволит на некоторое время полностью изменить прическу. Вы можете выбрать как крупные, так и мелкие или средние локоны. Эффект от процедуры сохраняется от нескольких месяцев до двух лет. Многие рекомендуют биозавивку только на здоровые волосы. Сделав такую процедуру, вы получите безупречную стрижку. Главное найти действительно высококвалифицированного специалиста.Этот фактор имеет важное значение, если вы хотите добиться идеального результата.

SEC.gov | Порог частоты запросов превысил

Чтобы обеспечить равный доступ для всех пользователей, SEC оставляет за собой право ограничивать запросы, исходящие от необъявленных автоматических инструментов. Ваш запрос был идентифицирован как часть сети автоматизированных инструментов, выходящих за рамки приемлемой политики, и будет управляться до тех пор, пока не будут предприняты действия по объявлению вашего трафика.

Пожалуйста, заявите о своем трафике, обновив свой пользовательский агент, включив в него информацию о компании.

Чтобы ознакомиться с рекомендациями по эффективной загрузке информации с SEC.gov, включая последние документы EDGAR, посетите сайт sec.gov/developer. Вы также можете подписаться на получение по электронной почте обновлений программы открытых данных SEC, включая передовые методы, которые делают загрузку данных более эффективной, и улучшения SEC.gov, которые могут повлиять на процессы загрузки по сценарию. Для получения дополнительной информации обращайтесь по адресу [email protected].

Для получения дополнительной информации см. Политику конфиденциальности и безопасности веб-сайта SEC.Благодарим вас за интерес, проявленный к Комиссии по ценным бумагам и биржам США.

Идентификатор ссылки: 0.7ecef50.1645312623.bd7646c

Дополнительная информация

Политика безопасности Интернета

Используя этот сайт, вы соглашаетесь на мониторинг и аудит безопасности. В целях безопасности и для обеспечения того, чтобы общедоступные услуги оставались доступными для пользователей, эта правительственная компьютерная система использует программы для мониторинга сетевого трафика для выявления несанкционированных попыток загрузить или изменить информацию или иным образом нанести ущерб, включая попытки отказать в обслуживании пользователям.

Несанкционированные попытки загрузки информации и/или изменения информации в любой части этого сайта строго запрещены и подлежат судебному преследованию в соответствии с Законом о компьютерном мошенничестве и злоупотреблениях от 1986 г. и Законом о защите национальной информационной инфраструктуры от 1996 г. (см. Раздел 18 USC §§ 1001 и 1030).

Чтобы обеспечить хорошую работу нашего веб-сайта для всех пользователей, SEC отслеживает частоту запросов на контент SEC.gov, чтобы гарантировать, что автоматический поиск не повлияет на возможность других получить доступ к SEC.содержание правительства. Мы оставляем за собой право блокировать IP-адреса, отправляющие чрезмерные запросы. Текущие правила ограничивают количество пользователей до 10 запросов в секунду, независимо от количества компьютеров, используемых для отправки запросов.

Если пользователь или приложение отправляет более 10 запросов в секунду, дальнейшие запросы с IP-адреса(ов) могут быть ограничены на короткий период. Как только количество запросов упадет ниже порогового значения на 10 минут, пользователь может возобновить доступ к контенту в SEC.правительство Эта практика SEC предназначена для ограничения чрезмерных автоматических поисков на SEC.gov и не предназначена и не ожидается, что она повлияет на отдельных лиц, просматривающих веб-сайт SEC.gov.

Обратите внимание, что эта политика может измениться, поскольку SEC управляет SEC.gov, чтобы обеспечить эффективную работу веб-сайта и его доступность для всех пользователей.

Примечание: Мы не предлагаем техническую поддержку для разработки или отладки процессов загрузки по сценарию.

Накопление липидов контролирует баланс между поверхностным соединением и разрывом кавеол

Основные версии:
1) В реферате авторы отмечают, что «холестерин и гликосфинголипиды специфически накапливаются в кавеолах, что уменьшает диаметр их шейки и способствует их отщеплению от клеточной поверхности.» Данные, подтверждающие расщепление, по-видимому, заключаются в сокращении продолжительности трека. Однако окончание отслеживания не обязательно означает отрыв от клеточной поверхности и может быть объяснено разборкой на плоскую мембрану. Либо перефразируйте, либо предоставьте данные, которые различают эти возможности.

Мы согласны с рецензентом в том, что это важный вывод рукописи, и именно поэтому мы провели так много экспериментов, чтобы проверить эту гипотезу. Теперь мы добавили больше экспериментов и дополнительно улучшили схематический рисунок 2А и уточнили текст относительно того, как различные состояния кавеол и как они будут отражаться в наших данных.Мы также улучшили описание того, как назначались и отслеживались кавеолы (см. также пункт 4). Данные, подтверждающие наш вывод о расщеплении, представлены на рис. 2 и рис. 3 вместе с дополнительными рисунками и текстом. Короче говоря, мы проанализировали количество следов до и после лечения и не увидели существенной разницы (рис. 2 — дополнение к рисунку 2C), которую можно было бы ожидать, если бы кавеолы были разобраны. Теперь мы также разъяснили текст относительно этого. Мы проанализировали продолжительность и скорость кавеол и обнаружили, что продолжительность уменьшается, а скорость увеличивается после включения гликосфинголипидов и Chol.Это согласуется с расщеплением кавеол, и мы также контролируем это с помощью анализа клеток EHD2 KO, в которых расщепление кавеол повышено (Moren et al., 2012, Stoeber et al., 2012, Matthaeus et al., 2020). Однако повышенная скорость не соответствовала бы разобранным кавеолам.

Мы продолжаем проверять нашу гипотезу на рисунке 3. На рисунке 3A мы анализируем, приводит ли лечение к изменению колокализации с EHD2 (указывает на высвобождение поверхности) и cavin1 (указывает на разборку).Мы обнаружили, что на колокализацию с EHD2, но не с cavin1, влияют гликосфинголипиды и Chol, поддерживающие расщепление. Теперь мы дополнили эксперименты новыми данными, как предложено в пункте 15. Для дальнейшей оценки этого мы провели новые эксперименты, в которых мы проанализировали совместную локализацию cavin1 и Cav1 в живых клетках с использованием TIRF до и после лечения. Эти данные показывают, что совместная локализация между cavin1 и Cav1 не изменяется после включения липидов, что снова подтверждает, что обнаруженный эффект обусловлен расщеплением (см. также ответ на комментарий 15).

Кроме того, как указано в рукописи, расщепление кавеол должно привести к более подвижным кавеолам внутри клеток, как показано ранее. На рисунке 3C мы показываем, что добавление липидов действительно индуцирует более подвижные кавеолы, как и истощение EHD2. Разборка или уплощение кавеол не приведет к этому. Мы также можем подавить эффект, индуцированный липидами, путем сверхэкспрессии EHD2, что снова указывает на то, что эффект липидов вызывает расщепление. Чтобы контролировать, чтобы экспрессия EHD2 не была вызвана вторичным эффектом из-за долгосрочной экспрессии EHD2, мы микроинъецировали EHD2 и наблюдали тот же эффект.Кроме того, на рисунке 3E, если добавление липидов и истощение EHD2 вызывают расщепление кавеол, то не должно быть аддитивного эффекта этих обработок, и это действительно то, что мы обнаруживаем на рисунке 3E.

Таким образом, учитывая эти эксперименты и результаты, мы пришли к выводу, что усиление динамики кавеол после повышения уровня гликосфинголипидов и Chol, скорее всего, связано с расщеплением кавеол, и поэтому мы сохранили это утверждение в реферате.

2) В реферате авторы говорят, что «индуцированному липидами расщеплению противодействовала АТФаза EHD2.Мы предполагаем, что накопление липидов в кавеолах создает внутренне нестабильный домен, склонный к разрыву, если он не уравновешен сдерживающей силой EHD2 в области шейки». Это требует дальнейшего разъяснения. Как EHD2 противодействует дисбалансу липидов? Важность АТФазы активность EHD2 также может быть лучше проанализирована с мутантом с дефицитом АТФазы в дополнение к мутанту I157Q.

В исправленной рукописи мы теперь более четко представили ранее описанный механистический цикл того, как EHD2 собирает и стабилизирует шейку кавеол, чтобы предотвратить разрыв и удерживать кавеолы на поверхности клетки посредством сборки в кольцевидные олигомеры (Daumke et al., 2007, Хорнке и др., 2017). Здесь мы продолжаем показывать, что накопление специфических липидов в кавеолах способствует расщеплению и дестабилизирует их поверхностную ассоциацию, но это может быть ограничено с помощью EHD2 (сверхэкспрессия или микроинъекция). Следовательно, мы предполагаем, что компоненты (как белки, так и липиды), образующие луковицу кавеол, создают сильно изогнутый внутренне нестабильный домен, склонный к разрыву, но что EHD2 обеспечивает сдерживающую силу на шейке кавеол, предотвращая разрыв.

Что касается роли АТФ-гидролиза, мы ранее создали и охарактеризовали различные мутанты EHD2 и их влияние на связывание и гидролиз АТФ, а также на кавеолы (Daumke et al., 2007, Морен и др., 2012). Мутант T94A с нарушением АТФазы вызывает избыточную сборку EHD2 и мембранные тубуляции (поскольку регуляторная активность АТФазы нарушена). Этот мутант тубулирует шейку кавеол, и поэтому трудно сделать прямые выводы о том, как АТФ-гидролиз сам по себе влияет на способность EHD2 стабилизировать индуцированное липидами расщепление кавеол на основе этого мутанта. В этой работе мы стремились использовать мутант I157Q, в котором АТФ-гидролиз не связан с АТФ-гидролизом, которые, следовательно, образуют олигомеры с медленным временем диссоциации, но без сверхсборки.Это позволяет нам изучить, достаточна ли олигомеризация EHD2 в шейке кавеол, чтобы предотвратить расщепление, вызываемое липидами, или же стабилизация требует постоянной адаптации сборки/разборки EHD2 посредством циклов АТФ-гидролиза. Мы разъяснили это в тексте.

3) Добавление липидов через фузогенные липосомы является фундаментальной основой исследования и требует тщательного изучения. Почему распределение липидов с помощью TIRF на рисунке 1B однородно, а на рисунке 1F нет? Как это неоднородное распределение перекрывается с пятнами Cav1? Различается ли гомогенность вставки для разных липидов? Одинаковы ли уровни экспрессии липидов в разных клетках одной и той же популяции?

Мы согласны с тем, что это важная часть исследования, и теперь мы добавили текст в раздел «Результаты», который отвечает на эти вопросы и ссылается на нашу обширную характеристику по всей рукописи (см. рис. 1B, 1F, рис. 2C, рис. 4A-D). , Рисунок 2 — дополнение к рисунку 2A, Рисунок 2 — видео 2, Рисунок 2 — видео 3, Рисунок 2 — видео 4, Рисунок 3 — дополнение к рисунку 1A, Рисунок 4 — дополнение к рисунку 2A-D), чтобы лучше охарактеризовать слияние и распределение липидов. липидов в начале раздела «Результаты».

Включение липидов было одинаковым для всех клеток популяции, что также наблюдалось на рисунке 1B, рисунке 2C и рисунке 2 — дополнение к рисунку 2A. Равномерное распределение липидов в ПМ наблюдалось для всех видов липидов (см. данные в рукописи). Однако иногда наблюдались яркие стабильные пятна и некоторое обогащение липидов в клеточных выступах независимо от вида липидов, как показано на рисунке 1B. Эти структуры не локализовались совместно с Cav-1. Теперь мы изменили рисунок 1F, чтобы не вызывать путаницы.

4) Динамика кавеол выводится из изображений TIRF Cav1-mCherry. Ключевым аспектом этого подхода является то, как кавеолы определяются из флуоресцентных пятен Cav1, что необходимо более четко определить в тексте.

Спасибо, что обратили наше внимание на возможность более подробного объяснения точечного анализа. Теперь это разъяснено в разделе «Материалы и методы». Мы также добавили подробный рисунок, описывающий метод в программном обеспечении Imaris для иллюстрации выбора точки (рис. 2 — дополнение к рисунку 3).

В тексте указано, что для определения пятен кавеол Cav1 был применен установленный порог, но в разделе «Материалы и методы» указано, что были выбраны пятна больше 0,4 мкм в диаметре. Почему был выбран этот размерный предел (кавеолы <100 нм и дифракционный предел ~200-250 нм)?

Несколько пятен кавеол-mCh были эмпирически измерены на изображениях TIRF, и пятна диаметром 0,4 мкм продемонстрировали лучший анализ пятен по сравнению с фильмами (рис. 2 — дополнение к рисунку 3).Это разъяснено в разделе «Материалы и методы» и добавлена ссылка на соответствующую литературу.

Не применялся порог интенсивности? Каково распределение интенсивности больших и маленьких пятен?

Да, был применен порог интенсивности, основанный на качестве интенсивности пятен, и мы добавили все соответствующие детали в раздел «Материалы и методы». Подробный рисунок, описывающий метод в программном обеспечении Imaris, был добавлен для иллюстрации выбора точки (рисунок 2 — дополнение к рисунку 3).

В какой степени экспрессия Cav1-mCherry сходна между клетками и насколько надежным является применение критериев отбора «кавеол» между клетками? Из фильмов видно, что количество ярких крупных пятен четко различается между клетками. Если это те, которые авторы считают кавеолами, то как объяснить, что в некоторых клетках так мало кавеол?

Теперь мы добавили рисунок (рисунок 1 — дополнение к рисунку 4), который показывает, что индуцированная Dox экспрессия Cav1-mCh аналогична уровням эндогенных кавеол по сравнению с неиндуцированными клетками, которые были зафиксированы и окрашены против Caveolin1.Кавеолы из фиксированных и живых клеток подсчитывали с использованием программного обеспечения Imaris, и было определено одинаковое количество кавеол, что свидетельствует о надежности приложения.

И как исключить, что эти структуры являются розетками, связанными с экспрессией EHD2? Как могут авторы исключить возможность того, что изменения в подвижности, которые они наблюдают, связаны не с расщеплением кавеол, а с фрагментацией розеток?

Мы видим некоторые пятна, которые больше и имеют большую интенсивность, чем другие, которые могут быть розетками или просто кавеолами, расположенными близко друг к другу.При анализе CLEM кавеол в клетках Hela мы редко обнаруживаем розетки. Однако, используя TIRF, у нас нет разрешения, чтобы определить это. Иногда мы наблюдали, что одно пятно может распадаться на два пятна, хотя это бывает редко. Мы не наблюдаем какого-либо увеличения количества пятен кавеол после лечения, которое имело бы место, если бы многие кластеры или розетки были фрагментированы. Более того, наблюдаемое увеличение скорости кавеол после включения Chol и сфинголипидов слишком быстрое, чтобы его можно было объяснить усилением латеральной диффузии отдельных кавеол.Фрагментация розеток с точки зрения расщепления будет неотличима от расщепления отдельных кавеол.

Пожалуйста, приложите рисунки и видео, показывающие места, выбранные для изучения, а также наложенные треки. Следует включить четкое обсуждение критериев, используемых для отнесения пятен Cav1 к отдельным кавеолам.

Подробный рисунок, описывающий метод в программном обеспечении Imaris, был добавлен для иллюстрации выбора точки (Рисунок 2 — дополнение к рисунку 3).

5) Фузогенные липосомы обеспечивают включение видов липидов, специфически обогащенных кавеолами, таких как холестерин, сфингомиелин, церамиды и гликосфинголипиды. Чтобы доказать, что регуляция стабильности кавеол специфична для кавеолярных липидов, было бы хорошо, если бы авторы могли показать, что динамика кавеол не нарушается после добавления других фосфолипидов, обнаруженных вне кавеол, таких как PC, PA, PG. Параллельно эксперименты по отслеживанию фокусируются только на динамике Cav1 при слиянии липосом (рис. 2 и рис. 3E-H).Но неясно, изменится ли динамика других некавеолярных белков PM (например, клатрина HC) после добавления выбранных липидов? Эти данные убедительно подтверждают специфичность описываемого явления.

Теперь мы пояснили в тексте, что мы анализируем не только липиды, о которых известно, что они обогащены кавеолами, и что точная липидомика кавеол неизвестна. Липиды в нашем исследовании тщательно отобраны, где мы используем глицерофосфолипиды PE (не обогащенные кавеолами), гликосфинголипиды LacCer и GM1 (предлагаемые обогащенными), церамиды (не обогащенные, но используемые для сравнения с гликозилированными LacCer и GM1), сфингомиелин ( предлагается обогатить) и Chol (предложено обогатиться).Мы согласны с тем, что существует больше липидов, которые могут быть интересны для изучения, но это выходит за рамки данного исследования.

Мы не собираемся утверждать, что измененный состав липидов будет специфически влиять только на динамику кавеол. Это также может повлиять, например, на ямки, покрытые клатрином (CCP), но для того, чтобы такие исследования были полезными, они должны быть помещены в контекст формирования и динамики CCP, что потребует полного проектирования, посвященного такой системе. Такое измерение потребует настройки и управления этой системой, а также выполнения всех соответствующих элементов управления для проверки потенциальных эффектов, как мы сейчас сделали для системы кавеол в этой рукописи.Поэтому, хотя это и интересно, мы считаем, что это необходимо будет рассмотреть в дальнейших исследованиях.

6) На рис. 2А представлена схема того, как продолжительность треков интерпретируется для отражения динамики кавеол. Основания для этих классификаций четко не представлены и неясно, зачем они нужны. В самом деле, зачем вообще вводить класс смежности с поверхностью, который, согласно количественной оценке на рис. 2В, составляет меньшинство обнаруженных следов. Данные на рис. 2B ясно показывают, что EDh3 siRNA уменьшает количество треков с низкой скоростью треков практически для всех длительностей треков, четко отражая повышенное расщепление кавеол при нокдауне EDh3.В свете беспокойства авторов относительно надежности продолжительности трека, почему бы просто не использовать простую классификацию скорости трека, используемую в 2B, для анализа влияния липидов на динамику кавеол.

Мы согласны с тем, что классификация не была четко описана, и благодарим рецензента за указание на это. Теперь мы переработали схематический рисунок (рис. 2А) и раздел текста, описывающий классификацию. Мы также согласны с тем, что скорость трека следует использовать для анализа влияния на динамику кавеол наряду с продолжительностью, и теперь разъяснили это в тексте.

7) Интересен эффект добавления SM-C12 к клеткам со сверхэкспрессией EDh3. Каков эффект обработки сфингомиелиназой на клетки EDh3 OE?

Чтобы решить эту проблему, мы провели новые эксперименты, анализирующие влияние SMase на динамику кавеол при сверхэкспрессии EHD2. Данные представлены в тексте и на рисунке 3F и показывают, что EHD2 может частично сдерживать уменьшение продолжительности и увеличение скорости кавеол, вызванных снижением уровней SM.

8) Пожалуйста, включите данные для контрольной миРНК на рисунке 3C и рисунке 3F.

Мы добавили данные для контрольной siRNA на рисунке 3C. Мы предполагаем, что рецензент ссылается на рисунок 3E вместо F, и мы хотели бы отметить, что данные для контрольной миРНК представлены на рисунке 3 — дополнение к рисунку 2B.

9) Некоторые липиды встраиваются менее эффективно (SM C5 и C12 и в меньшей степени Cer). Поскольку все эксперименты проводятся с одинаковым количеством липосом, это может объяснить, почему параметры отслеживания (рис. 3D, F) не отличаются от контрольных условий.Не нарушит ли динамика кавеол добавление в 3 раза больше SM C5?

Теперь мы провели эксперименты, в которых к клеткам было добавлено в 3 раза больше липосом, содержащих SMC5. Таким образом, включение этого липида было увеличено (рис. 2D), но еще не было обнаружено никакого влияния на динамику кавеол (рис. 2 — дополнение к рисунку 2D).

10) Является ли вызванное липидами расщепление кавеол чисто липидным путем за счет возмущений кривизны мембраны или оно опосредовано белками, сжимающими мембрану? Авторы должны проверить участие dynamin2, который, как известно, связан с шейкой кавеол и способствует их интернализации.Меньше EHD2 колокализуется с Cav1-mCherry через 1 ч после слияния липосом, содержащих GM1, LacCer или Chol, но обнаруживается ли Dynamin2 чаще с Cav1-позитивными структурами в этих условиях?

Мы полностью согласны с тем, что это очень интересный вопрос. Однако для выяснения этого потребуются очень далеко идущие механистические исследования, чтобы не делать поспешных выводов. Мы проводим обширное исследование роли dynamin2 в расщеплении кавеол в сотрудничестве с несколькими исследовательскими группами.Эта работа все еще продолжается, но ясно, что наши данные не полностью согласуются с современной литературой о роли динамина-2, что очень интересно. Мы стремимся собрать всестороннее исследование динамина 2 и кавеол, поэтому добавление отдельных данных, касающихся динамина 2, в текущую рукопись может привести к искажению общих выводов о роли динамина 2.

11) Диффузия липидов на кавеолах является важной частью этой рукописи.Пожалуйста, включите этот пункт в аннотацию. Пожалуйста, подчеркните, что сравнение FRAP в кавеолах с массой PM необходимо для обсуждения диффузии липидов в кавеолах и в массе PM. На рисунке 4D кривые FRAP относятся к ROI, но эти ROI не указаны.

Спасибо, это очень хорошие предложения, и теперь мы указали ROI, в которых измеряются кривые восстановления, и включили сравнение восстановления в кавеолах и в окружающих ТЧ (рис. 4E и рис. 4 — дополнение к рисунку 3).Мы согласны с тем, что это важная часть рукописи, и добавили в реферат диффузию и секвестрацию липидов.

12) На рисунке 4C неясно, что такое зона обесцвечивания, а на рисунке 4D почему этот анализ не распространяется на другие липиды? Аналогично исследованиям ЭМ на рисунке 5, почему они не выполняются для других липидов, в частности SM-C12?

Спасибо, что указали на это. Теперь мы сделали более четкое представление обесцвеченной зоны и областей интереса, где анализируется восстановление.Теперь мы также расширили анализ, включив в него SM C ₁₂, который также сильно обогащен кавеолами в клетках со сверхэкспрессией EHD2 (рис. 4 — дополнение к рисунку 3). См. также ответ на пункт 11.

13) Пожалуйста, объясните разницу между верхней и нижней панелями на рисунках 5B и 5C. Кроме того, поясните, почему имеется в виду разный внешний вид верхней и нижней панелей. Измерения формы проводились только для клеток с добавлением холестерина, этот анализ также следует проводить для клеток с добавлением LacCer.

Приносим свои извинения за нечеткое описание разницы между верхней и нижней панелями. Теперь это добавлено в легенду рисунка. Мы также дополнительно объяснили, как мы используем эти данные для количественной оценки либо шейки кавеол, либо площади поверхности кавеол.

Клетки адипоцитов использовались в качестве системы, в которой мы можем количественно оценить влияние Chol, поскольку эти клетки физиологически важны для гомеостаза Chol, кавеолы обогащены Chol (Örtegren et.al., 2004), и эти клетки имеют многочисленные кавеолы на клеточной поверхности. Клетки адипоцитов не содержат и не содержат обнаруживаемых уровней LacCer (Örtegren et.al., 2004). Поэтому мы не включили анализ включения LacCer, поскольку интерпретация таких данных, наряду с данными Chol, была бы затруднена, учитывая, что в этом случае мы ввели бы липид, обычно не присутствующий в этих клетках. Теперь мы разъяснили это в тексте.

14) На рис. 5, если расщепление кавеол усилилось, то некоторые из них пошли бы в эндосомы.Так ли это? Некоторые контрольные эксперименты с использованием, например, Bodipy-PE были бы информативны.

При CLEM-анализе клеток HeLa мы наблюдали случайные внутренние красные пятна (Cav1-mCherry), где кавеолоподобные структуры сливались с эндосомами. Однако они были довольно редки, что мешало количественным утверждениям, и без дополнительной маркировки эндосомально-подобный компартмент не мог быть проверен. Поэтому мы не включили это в рукопись. Мы количественно оценили количество кавеол, которые совместно локализуются с Rab5 до и после обработки липидами, и мы не обнаружили значительных изменений (рис. 6C).Как упомянуто в тексте и в ответе на комментарий 15, большинство расщепленных кавеол, по-видимому, остаются в виде прилегающих к поверхности кавеол после расщепления, индуцированного липидами.

15) Результаты на фиг. 6 не показывают очевидного влияния истощения Cav1 на эндосомальную локализацию Bodipy-липидов. Итак, какова судьба интернализованных кавеол, заполненных липидами после разреза? Остаются ли они рядом с ПМ и сливаются обратно? Каково количество/доля липидов (LacCer), обнаруженных в Rab5-позитивных структурах через 15 минут и 3 часа? Кроме того, следует оценить возможность уплощения кавеол, вызванного липидной нагрузкой ПМ.На рисунке 3B показана колокализация Cav1-mCh с эндогенным Cavin1 в максимальной z-проекции конфокальных изображений. Авторы также должны отслеживать совместную локализацию Cav1-Cavin с помощью TIRF и сравнивать количество Cav1-положительных структур/точек, совмещающихся с Cavin1, до и после добавления фузогенных липосом, и смотреть, вызывает ли это состояние исчезновение/разборку кавеол (не интернализацию).

Мы не видим измененного количества пятен в клетках, где кавеолы динамичны из-за добавления липидов, что позволяет предположить, что они отщепляются и остаются поблизости или отказываются.Теперь мы разъяснили это в тексте. Как было предложено, теперь мы также добавили количественную оценку количества кавеол, которые колокализуются в Rab5-позитивных структурах до и после обработки липидами. Проценты довольно низкие, и мы обнаруживаем значительные изменения после лечения липидами.

Спасибо за хорошее предложение проанализировать влияние на разборку/уплощение кавеол путем мониторинга колокализации Cav1 и cavin1 с помощью TIRF. Теперь мы провели эти эксперименты до и после обработки липидами, и данные представлены на рисунке 3 — дополнение к рисунку 1.Мы обнаружили, что нет существенной разницы в степени колокализации после включения любого из липидов.

16) Эксперименты, в которых состав липидов изменяется в противоположном направлении, могут усилить аргументы этой статьи. Было бы полезно сравнить эффекты истощения холестерина, например, при лечении метил-β-циклодекстрином.

Как упоминалось в рукописи, быстрое, но контролируемое снижение уровня специфических липидов технически сложно.Мы смогли использовать SMase-лечение для снижения уровня SM (рис. 2G). Мы также провели множество экспериментов по оптимизации использования MBCD (время и концентрация) для снижения уровня холестерина, как это было предложено. Однако лечение MBCD приводит к немедленному и резкому сокращению клеток, в результате чего отслеживание становится неясным и не поддается количественной оценке. Поэтому мы не уверены, что сможем использовать эту методологию для снижения уровня Chol и измерения влияния на динамику кавеол.

https://дои.org/10.7554/eLife.55038.sa2

Иновационная текстур- укладка TOCOSME

Преимущества TOCOSME перед традиционной завивкой

TOCOSME в действии

Уникальные свойства формулы TOCOSME

Технология с цистеамином — инновационный путь здоровья волос

Натуральные компоненты TOCOSME для здоровья и ухода за волосами

Японская завивка TOCOSME — красота без жертв!

Японская биозавивка волос в Абакане

Японская биозавивка волос в Абакане: адреса компаний

Популярные салоны красоты

Японская завивка волос в Москве – 9590 частных мастеров c ценами, фото и отзывами.

Японская завивка волос — что нужно знать?

Лечебный эффект

Проведение процедуры

специфические особенности и преимущества технологии

Виды химической завивки волос

Отличия немецкой и японской технологий

Преимущества японской химической завивки

Важные моменты

Химическая завивка «крупные локоны»: технология

Правила ухода за волосами после завивки

Японская биозавивка волос в Абакане

Японская биозавивка волос в Абакане: адреса компаний

Популярные парикмахерские

что это, сколько держится, препараты, технология выполнения

Что такое японская завивка волос

Преимущества

Недостатки

Противопоказания и ограничения

Применяемые инструменты, средства и препараты

Технология выполнения

Особенности накрутки на волосы разной длины

Японская завивка в домашних условиях

Последующий уход

Сколько держится японская завивка

HAHONICO SPAT Японская биозавивка для волос, 1500 грн. — Kidstaff

Подробное описание: HAHONICO SPAT Японская биозавивка для волос

Фокус превращается в быстрорастущие медицинские компании с малой капитализацией

Обзор технологий

Frontiers | Ацибензолар-S-метил систематически активирует устьичную защиту японской редьки

Введение

Материалы и методы

Растительные материалы и химическая обработка

Бактериальные штаммы и условия роста

Бактериальная инокуляция

Количественная ОТ-ПЦР в реальном времени

Устьичный анализ

Статистический анализ

Результаты

ASM подавляет развитие болезни

ASM активирует защиту на основе устьиц от

Применение SHAM уменьшает вызванное ASM закрытие устьиц в местных и системных листьях японской редьки

ASM индуцирует экспрессию генов, связанных с защитой, в японской редьке

Обсуждение

Заявление о доступности данных

Вклад авторов

Финансирование

Конфликт интересов

Благодарности

Дополнительный материал

Ссылки

Ацибензолар-S-метил системно активирует устьичную защиту японской редьки

Нанами Саката

Такако Исига

Shizuku Taniguchi

Yasuhiro Ishiga

Abstract

Введение

Материалы и методы

Растительные материалы и химическая обработка

Бактериальные штаммы и условия роста

Бактериальная инокуляция

Количественная ОТ-ПЦР в реальном времени

Анализ устьиц

Статистический анализ

Результаты

ASM подавляет развитие болезни

ASM активирует устьичную защиту против

Применение SHAM уменьшает индуцированное ASM закрытие устьиц в местных и системных листьях японской редьки

ASM индуцирует экспрессию генов, связанных с защитой, у японской редьки